Geração e Manipulação de Organoides Intestinais em Rato

Ao usar organoides para avaliar a fisiologia e as decisões de destino celular, é importante usar um modelo que recapitule de perto os contextos in vivo . Assim, organoides derivados do paciente são usados para modelagem de doenças, descoberta de drogas e triagem de tratamento personalizada. Organoides intestinais de camundongos são comumente utilizados para entender aspectos da função/fisiologia intestinal e decisões dinâmicas/destino de células-tronco. No entanto, em muitos contextos de doenças, os ratos são frequentemente preferidos em relação aos camundongos como modelo devido à sua maior semelhança fisiológica com os humanos em termos de fisiopatologia da doença. O modelo de rato tem sido limitado pela falta de ferramentas genéticas disponíveis in vivo, e organoides intestinais de ratos têm se mostrado frágeis e difíceis de cultivar a longo prazo. Aqui, nós nos baseamos em protocolos publicados anteriormente para gerar organoides intestinais robustos de ratos a partir do duodeno e jejuno. Fornecemos uma visão geral de várias aplicações a jusante utilizando organoides intestinais de ratos, incluindo ensaios funcionais de inchamento, coloração de montagem inteira, geração de monocamadas enteróides 2D e transdução lentiviral. O modelo organoide de rato fornece uma solução prática para a necessidade do campo para um modelo in vitro que mantenha relevância fisiológica para humanos, possa ser rapidamente manipulado geneticamente e seja facilmente obtido sem as barreiras envolvidas na aquisição de organoides intestinais humanos.