A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
ספירומטריה קולומטרית אידיאלית למדידת קצב חילוף החומרים של אורגניזמים קטנים. כאשר הותאם עבור Drosophila melanogaster במחקר הנוכחי, צריכת O2 שנמדדה הייתה בטווח שדווח עבור סוג בר D. melanogaster על ידי מחקרים קודמים. צריכת O2 לכל זבוב על ידי מוטנטים של ASK שהם קטנים יותר ופעילים פחות, הייתה נמוכה משמעותית מזו של ה-wildtype .
מיקרו-רספירומטריה קולומטרית היא שיטה פשוטה וזולה למדידת צריכת O2 של אורגניזמים קטנים תוך שמירה על סביבה יציבה. מיקרו-רספירומטר קולומטרי מורכב מתא אטום שבו O 2 נצרך וה- CO2 המיוצר על ידי האורגניזם מוסר על ידי מדיום סופג. ירידת הלחץ כתוצאה מכך מפעילה ייצור אלקטרוליטי O 2, וכמות O2 המיוצרת נמדדת על ידי רישום כמות המטען המשמש ליצירתו. במחקר הנוכחי הותאמה השיטה לדרוזופילה מלנוגסטר שנבדקה בקבוצות קטנות, כאשר רגישות המכשיר ותנאי הסביבה מותאמים ליציבות גבוהה. כמות O2 הנצרכת על ידי זבובי בר במנגנון זה עקבית עם זו שנמדדה על ידי מחקרים קודמים. צריכת O2 ספציפית למסה על ידי מוטנטים של TASK, שהם קטנים יותר וידועים כפחות פעילים, לא הייתה שונה מקבוצת ביקורת קונגנית. עם זאת, הגודל הקטן של מוטנטים CASK הביא לירידה משמעותית בצריכת O2 על בסיס זבוב. לכן, המיקרו-רספירומטר מסוגל למדוד את צריכת O2 ב-D. melanogaster, יכול להבחין בהבדלים צנועים בין גנוטיפים, ומוסיף כלי רב-תכליתי למדידת קצב חילוף החומרים.
היכולת למדוד קצב חילוף חומרים חיונית להבנה מלאה של אורגניזם בהקשר הסביבתי שלו. לדוגמה, יש צורך למדוד את קצב חילוף החומרים כדי להבין את תפקידו בתוחלת החיים1, את תפקיד הדיאטה בחילוף החומרים2, או את הסף ללחץ היפוקסי3.
ישנן שתי גישות כלליות למדידת קצב חילוף החומרים4. קלורימטריה ישירה מודדת את הוצאת האנרגיה ישירות על ידי מדידת ייצור חום. קלורימטריה עקיפה מודדת את ייצור האנרגיה באמצעים אחרים, לעתים קרובות באמצעות מדידה ספירומטרית של צריכת O 2 (VO2), ייצור CO2 או שניהם. למרות שקלורימטריה ישירה יושמה על אקטורמות קטנות, כו....
1. גידול ואיסוף זבובים
הלחץ ותפוקות הזרם של בקר הרספירומטר מוצגים עבור תא אחד בניסוי אחד באיור 3A. פעימת הזרם הארוך הראשונה לחצה על התא מלחץ הסביבה (כ-992 hPa) לסף OFF שנקבע מראש של 1017 hPa. כאשר הזבובים שצרכו O 2 ו-CO 2 נספגו, הלחץ ירד לאט עד שהגיע לסף ON של 1016 hPa, אשר הפעיל זרם דרך מחולל O2. בדוגמ.......
ההליך לעיל מדגים מדידה של צריכת O2 ב- D. Melanogaster באמצעות מיקרו-רספירומטר קולומטרי אלקטרוני. הנתונים שהתקבלו עבור צריכת O2 במלנוגסטר מסוג D פראי היו בטווח שתואר ברוב הפרסומים הקודמים בשיטות מגוונות (טבלה 1), אם כי נמוכים במקצת מאלה שדווחו על ידי אחרים 3,6
אנו מודים לד"ר לינדה רסטיפו מאוניברסיטת אריזונה על שהציעה לבדוק את צריכת O2 של מוטציות CASK ועל שליחת מוטנטי CASK והבקרות הקונגניות שלהם. דמי הפרסום ניתנו על ידי הקרן המחלקתית להשקעה מחדש מהמחלקה לביולוגיה באוניברסיטת קולג' פארק. שטח וכמה ציוד סופקו על ידי האוניברסיטאות בשיידי גרוב.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
19/22 Thermometer Adapter | Wilmad-Labglass | ML-280-702 | Sensor Plug |
2 ml Screwcap Tubes | Fisher | 3464 | O2 generator |
2-Pin Connector | Zyamy | 40PIN-RFB10 | O2 generator: cut to 2-pin |
4-Pin Female Connector | TE Connectivity | 215299-4 | Sensor Plug |
5 ml Polypropylene Tube | Falcon | 352063 | Cut to 5.5 cm and perforated |
50 ml Schlenk Tube 19/22 Joint | Laboy | HMF050804 | Chamber |
6-Conductor Cable | Zenith | 6-Conductor 26 ga | Cable |
6-Pin Female Bulkhead Connector | Switchcraft | 17982-6SG-300 | Controller |
6-Pin Female Connector | Switchcraft | 18982-6SG-522 | Sensor plug |
6-Pin Male Connector | Switchcraft | 16982-6PG-522 | Cable |
800 ul centrifuge tube | Fisher | 05-408-120 | Soda Lime Cartridge |
ABS Plastic Enclosure | Bud Industries | PS-11533-G | Controller |
Arduino Nano Every | Arduino LLC | ABX00028 | Controller |
BME 280 Sensor | DIYMall | FZ1639-BME280 | Sensor Plug |
Circuit Board | Lheng | 5 X 7 cm | Controller |
Copper Sulfate | BioPharm | BC2045 | O2 Generator |
Computer | Azulle | Byte4 | Data Acquisition |
Cotton Rolls | Kajukajudo | #2 | Cut in half to plug fly tubes Cut in quarters for humidity |
Environmental Chamber | Percival | I30 VLC8 | Fly Care |
Epoxy | JB Weld | Plastic Bonder | Secure Electrodes in O2 Generator |
Fly Food | Lab Express | Type R | Fly Care |
Keck Clamps | uxcell | a20092300ux0418 | Secures glass joint of chamber to plug |
Low-Viscosity Epoxy | Loctite | E-30CL | Sensor Plug |
OLED Display | IZOKEE | IZKE31-IIC-WH-3 | Controller |
Platinum Wire 24 ga | uGems | 14349 | O2 generator |
Silicone grease | Dow-Corning | High Vacuum Grease | Seals chamber-plug connection |
Soda Lime | Jorvet | JO553 | CO2 absorption |
Toggle Switch | E-Switch | 100SP1T1B1M1QEH | Controller |
USB Cable | Sabrent | CB-UM63 | Controller |
USB Hub | Atolla | Hub 3.0 | Connect controllers to computer |
Water bath | Amersham | 56-1165-33 | Temperature Control |
Water Bath Tank | Glass Cages | 15-liter rimless acrylic | Bath for Respirometers |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved