Agrobacterium tumefaciens-mediert genteknologi av grønne mikroalger, Chlorella vulgaris

Agrobacterium tumefaciens-mediert transformasjon (AMT) fungerer som et mye brukt verktøy for å manipulere plantegenomer. Imidlertid viser A. tumefaciens kapasiteten til genoverføring til et mangfoldig utvalg av arter. Mange mikroalgearter mangler veletablerte metoder for pålitelig integrering av gener av interesse i deres kjernefysiske genom. For å utnytte de potensielle fordelene ved mikroalgebioteknologi er enkle og effektive genommanipulasjonsverktøy avgjørende. Her presenteres en optimalisert AMT-protokoll for den industrielle mikroalgearten Chlorella vulgaris, ved bruk av reportergrønt fluorescerende protein (mGFP5) og antibiotikaresistensmarkøren for Hygromycin B. Mutanter velges ved plating på Tris-Acetat-Phosphate (TAP) media som inneholder Hygromycin B og cefotaxim. Ekspresjon av mGFP5 kvantifiseres via fluorescens etter over ti generasjoner med subkulturering, noe som indikerer den stabile transformasjonen av T-DNA-kassetten. Denne protokollen tillater pålitelig generering av flere transgene C. vulgaris-kolonier på under to uker, ved bruk av den kommersielt tilgjengelige pCAMBIA1302-planteuttrykksvektoren.