Reproduceerbaarheid en harmonisatie in onderzoek met behulp van biologische standaarden: het voorbeeld van bloedplaatjesagonist collageen-gerelateerd peptide

Metrologie - de wetenschap van de maat - is een onderwerp waarover maar weinig biologische wetenschappers in hun opleiding worden onderwezen, tot hun nadeel; De toepassing van eenvoudige standaardisatieprocessen op de dagelijkse werkpraktijk zorgt voor vertrouwen in gegevens en reproduceerbaarheid over afstand en tijd.

Deze methode laat zien hoe een kernlaboratoriumexperiment kan worden gestandaardiseerd dat veel wordt gebruikt in hemostaseonderzoek en klinische praktijk, met name het meten van reacties op de bloedplaatjescollageenreceptor (glycoproteïne [GP]VI) agonist collageengerelateerd peptide, verknoopt (CRP-XL) door lichttransmissie-aggregometrie (LTA). Het gebruik van deze aanpak zorgt voor reproduceerbaarheid binnen het laboratorium en harmonisatie tussen laboratoria, ongeacht de voorraad agonisten of leveranciers. Belangrijk is dat deze methode toepasbaar is op andere bloedplaatjesagonisten en, inderdaad, vele andere biologische moleculen en bioassays.

Het hieronder beschreven proces omvat het maken van een 6-8-punts verdunningsreeks van de 'standaard' en de 'test' (het materiaal dat u controleert) en deze naast elkaar te laten lopen in een gekozen test (in dit geval LTA). CRP-XL wordt gebruikt bij massa/volumeconcentraties, maar niet elk materiaal geeft dezelfde biologische activiteit bij een bepaalde concentratie, dus wordt een verdunningsreeks gemaakt om het standaard- en testmateriaal te vergelijken en te bepalen welke concentratie nodig is om een gelijkwaardige activiteit te geven. De verdunningsreeks moet 0-100% aggregatie omvatten. De gegevens worden uitgezet met behulp van niet-lineaire regressie en de EC_50-waarde van elk monster (standaard en test) wordt bepaald. Om activiteit toe te wijzen, deelt u de EC_50-waarde van de norm door die van de test om te bepalen hoeveel meer of minder krachtig deze is en past u de concentratie dienovereenkomstig aan. Deze aanpak zorgt ervoor dat steeds weer dezelfde biologische 'activiteit' aan de test wordt toegevoegd.