Reproductibilité et harmonisation dans la recherche à l’aide d’étalons biologiques : l’exemple du peptide associé au collagène agoniste plaquettaire

La métrologie - la science de la mesure - est un sujet que peu de biologistes apprennent dans leur formation à leur détriment ; L’application de processus de standardisation simples aux pratiques de travail quotidiennes permet d’avoir confiance dans les données et d’assurer la reproductibilité à distance et dans le temps.

Cette méthode montre comment normaliser une expérience de laboratoire de base largement utilisée dans la recherche sur l’hémostase et la pratique clinique, en particulier, en mesurant les réponses au peptide lié au collagène agoniste du récepteur du collagène plaquettaire (glycoprotéine [GP]VI), réticulé (CRP-XL) par agrégation de transmission de la lumière (LTA). L’utilisation de cette approche assurera la reproductibilité intra-laboratoire et l’harmonisation inter-laboratoire, quel que soit le stock d’agonistes ou le fournisseur. Il est important de noter que cette méthode est applicable à d’autres agonistes plaquettaires et, en fait, à de nombreuses autres molécules biologiques et essais biologiques.

Le processus décrit ci-dessous consiste à faire une série de dilution de 6 à 8 points de la « norme » et du « test » (le matériau que vous vérifiez) et à les exécuter côte à côte dans un test choisi (dans ce cas, LTA). Le CRP-XL est utilisé à des concentrations massiques/volumiques, mais tous les matériaux ne donnent pas la même activité biologique à une concentration donnée, de sorte qu’une série de dilution est effectuée pour comparer l’étalon et le matériau d’essai et déterminer quelle concentration est nécessaire pour donner une activité équivalente. La série de dilution doit couvrir une agrégation de 0 à 100 %. Les données sont tracées à l’aide d’une régression non linéaire et la valeur EC₅₀ de chaque échantillon (étalon et test) est déterminée. Pour attribuer l’activité, divisez la valeur EC₅₀ de l’étalon par celle de l’essai pour déterminer sa puissance plus ou moins élevée et ajustez la concentration en conséquence. Cette approche garantira que la même « activité » biologique est ajoutée à l’essai encore et encore.