Riproducibilità e armonizzazione nella ricerca utilizzando standard biologici: l'esempio del peptide correlato al collagene agonista piastrinico

La metrologia - la scienza della misura - è una materia che pochi scienziati biologici vengono istruiti nella loro formazione a loro danno; L'applicazione di semplici processi di standardizzazione alle pratiche di lavoro quotidiane fornisce fiducia nei dati e riproducibilità a distanza e nel tempo.

Questo metodo dimostra come standardizzare un esperimento di laboratorio di base ampiamente utilizzato nella ricerca sull'emostasi e nella pratica clinica, in particolare, misurando le risposte al peptide correlato al collagene agonista del recettore piastrinico (glicoproteina [GP]VI), reticolato (CRP-XL) mediante aggregometria a trasmissione luminosa (LTA). L'utilizzo di questo approccio garantirà la riproducibilità intra-laboratorio e l'armonizzazione inter-laboratorio, indipendentemente dallo stock o dal fornitore di agonisti. È importante sottolineare che questo metodo è applicabile ad altri agonisti piastrinici e, in effetti, a molte altre molecole biologiche e saggi biologici.

Il processo descritto di seguito prevede la creazione di una serie di diluizioni a 6-8 punti dello "standard" e del "test" (il materiale che si sta controllando) e l'esecuzione fianco a fianco in un saggio scelto (in questo caso, LTA). Il CRP-XL viene utilizzato a concentrazioni di massa/volume, ma non tutti i materiali danno la stessa attività biologica a una data concentrazione, quindi viene effettuata una serie di diluizioni per confrontare il materiale standard e quello di prova e determinare quale concentrazione è necessaria per dare un'attività equivalente. La serie di diluizione deve estendersi da 0 a 100% di aggregazione. I dati vengono tracciati utilizzando la regressione non lineare e viene determinato il valore EC₅₀ di ciascun campione (standard e test). Per assegnare l'attività, dividere il valore EC₅₀ dello standard per quello del test per determinare quanto è più o meno potente e regolare la concentrazione di conseguenza. Questo approccio garantirà che la stessa "attività" biologica venga aggiunta al test più e più volte.