Воспроизводимость и гармонизация в исследованиях с использованием биологических стандартов: на примере агониста тромбоцитов коллаген-связанного пептида

Метрология - наука о измерении - это предмет, которому мало кто из ученых-биологов преподается в процессе обучения в ущерб себе; Применение простых процессов стандартизации в повседневной работе обеспечивает уверенность в данных и воспроизводимость в зависимости от расстояния и времени.

Этот метод демонстрирует, как стандартизировать основной лабораторный эксперимент, широко используемый в исследованиях гемостаза и клинической практике, в частности, измерение ответов на агонист рецептора тромбоцитарного коллагена (гликопротеин [GP]VI), сшитый пептид, связанный с коллагеном (CRP-XL), с помощью агрегометрии светопропускания (LTA). Использование этого подхода обеспечит внутрилабораторную воспроизводимость и межлабораторную гармонизацию, независимо от наличия агонистов или поставщика. Важно отметить, что этот метод применим и к другим агонистам тромбоцитов, и ко многим другим биологическим молекулам и биотестам.

Процесс, описанный ниже, включает в себя проведение серии 6-8-точечных разбавлений «стандарта» и «теста» (материала, который вы проверяете) и их параллельное выполнение в выбранном анализе (в данном случае LTA). CRP-XL используется при массовых/объемных концентрациях, но не каждый материал дает одинаковую биологическую активность при заданной концентрации, поэтому для сравнения стандартного и испытуемого материала и определения того, какая концентрация необходима для получения эквивалентной активности, делается серия разведений. Серия разбавления должна охватывать агрегацию от 0 до 100%. Данные строятся с помощью нелинейной регрессии, и определяется значение EC₅₀ для каждого образца (стандартного и тестового). Чтобы определить активность, разделите значение EC₅₀ стандарта на значение теста, чтобы определить, насколько он более или менее сильнодействующий, и соответствующим образом отрегулируйте концентрацию. Такой подход гарантирует, что одна и та же биологическая «активность» будет добавляться к анализу снова и снова.