Нефракционированная объемная культура скелетных мышц мышей для повторения нишевого покоя и покоя стволовых клеток

Скелетные мышцы являются самой большой тканью тела и выполняют множество функций, от передвижения до контроля температуры тела. Его функциональность и восстановление после травм зависят от множества типов клеток и от молекулярных сигналов между основными мышечными клетками (миоволокнами, мышечными стволовыми клетками) и их нишей. Большинство экспериментальных установок не сохраняют это сложное физиологическое микроокружение, а также не позволяют исследовать ex vivo мышечные стволовые клетки в состоянии покоя, которое имеет для них решающее значение. Здесь изложен протокол культивирования ex vivo мышечных стволовых клеток с клеточными компонентами их ниши. Путем механического и ферментативного расщепления мышц получается смесь типов клеток, которая помещается в 2D-культуру. Иммуноокрашивание показывает, что в течение 1 недели в культуре присутствуют несколько нишевых клеток наряду с миоволокнами и, что важно, Pax7-положительными клетками, которые проявляют характеристики спящих мышечных стволовых клеток. Эти уникальные свойства делают этот протокол мощным инструментом для клеточной амплификации и получения покоящихся стволовых клеток, которые могут быть использованы для решения фундаментальных и трансляционных вопросов.