माउस कंकाल की मांसपेशी की असमान थोक संस्कृति आला और स्टेम सेल की गतिशीलता को पुन: उत्पन्न करने के लिए

Summary

कंकाल की मांसपेशी में निवासी स्टेम कोशिकाओं सहित कई सेल प्रकार शामिल हैं, जिनमें से प्रत्येक मांसपेशी होमियोस्टैसिस और पुनर्जनन में विशेष योगदान देता है। यहां, मांसपेशियों की स्टेम कोशिकाओं की 2 डी संस्कृति और एक पूर्व विवो सेटिंग में मांसपेशी कोशिका आला जो कई शारीरिक, विवो और पर्यावरणीय विशेषताओं को संरक्षित करती है, का वर्णन किया गया है।

Abstract

कंकाल की मांसपेशी शरीर का सबसे बड़ा ऊतक है और हरकत से लेकर शरीर के तापमान नियंत्रण तक कई कार्य करता है। इसकी कार्यक्षमता और चोटों से वसूली सेल प्रकारों की भीड़ और कोर मांसपेशी कोशिकाओं (मायोफाइबर, मांसपेशी स्टेम सेल) और उनके आला के बीच आणविक संकेतों पर निर्भर करती है। अधिकांश प्रयोगात्मक सेटिंग्स इस जटिल शारीरिक माइक्रोएन्वायरमेंट को संरक्षित नहीं करती हैं, और न ही वे मांसपेशियों की स्टेम कोशिकाओं के पूर्व विवो अध्ययन की अनुमति देते हैं, एक सेल अवस्था जो उनके लिए महत्वपूर्ण है। यहां, उनके आला के सेलुलर घटकों के साथ मांसपेशी स्टेम कोशिकाओं की पूर्व विवो संस्कृति के लिए एक प्रोटोकॉल को रेखांकित किया गया है। मांसपेशियों के यांत्रिक और एंजाइमेटिक टूटने के माध्यम से, सेल प्रकारों का मिश्रण प्राप्त किया जाता है, जिसे 2 डी संस्कृति में रखा जाता है। इम्यूनोस्टेनिंग से पता चलता है कि 1 सप्ताह के भीतर, कई आला कोशिकाएं मायोफाइबर के साथ संस्कृति में मौजूद हैं और, महत्वपूर्ण रूप से, पैक्स 7-पॉजिटिव कोशिकाएं जो क्विसेंट मांसपेशी स्टेम कोशिकाओं की विशेषताओं को प्रदर्शित करती हैं। ये अद्वितीय गुण इस प्रोटोकॉल को सेल प्रवर्धन और क्विसेंट जैसी स्टेम कोशिकाओं की पीढ़ी के लिए एक शक्तिशाली उपकरण बनाते हैं जिनका उपयोग मौलिक और ट्रांसलेशनल प्रश्नों को संबोधित करने के लिए किया जा सकता है।

Introduction

आंदोलन, श्वास, चयापचय, शरीर की मुद्रा, और शरीर का तापमान रखरखाव सभी कंकाल की मांसपेशियों पर निर्भर करते हैं, और कंकाल की मांसपेशियों में खराबी, इस प्रकार, दुर्बल विकृति (यानी, मायोपैथिस, मांसपेशियों की डिस्ट्रोफी, आदि) का कारण बन सकती है। ¹. इसके आवश्यक कार्यों और बहुतायत को देखते हुए, कंकाल की मांसपेशियों ने दुनिया भर में अनुसंधान प्रयोगशालाओं का ध्यान आकर्षित किया है जो सामान्य मांसपेशी समारोह का समर्थन करने वाले प्रमुख पहलुओं को समझने का प्रयास करते हैं और चिकित्सीय लक्ष्यों के रूप में काम कर सकते हैं। इसके अलावा, कंकाल की मांसपेशी पुनर्जनन और स्टेम सेल फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए एक व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला....

Protocol

सभी प्रयोगों ने इंस्टीट्यूट मोंडोर डी रेचरचे बायोमेडिकल (INSERM U955) में फ्रांसीसी और यूरोपीय संघ के पशु नियमों का अनुपालन किया, विशेष रूप से निर्देश 2010/63 / UE। जानवरों को प्रमाणन संख्या ए 94 028 379 और डी 94-028-028 के साथ पश.......

Discussion

वयस्क कंकाल की मांसपेशी समारोह को सेलुलर इंटरैक्शन और आणविक संकेतों के एक बारीक व्यवस्थित सेट द्वारा रेखांकित किया जाता है। यहां, एक विधि प्रस्तुत की जाती है जो एक पूर्व विवो सेटिंग में इन मापदंडो?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anti-CD31	BD	550274	dilution 1:100
anti-FOSB	Santa Cruz	sc-7203	dilution 1:200
anti-GFP	Abcam	ab13970	dilution 1:1000
anti-Ki67	Abcam	ab16667	dilution 1:1000
anti-MyHC	DSHB	MF20-c	dilution 1:400
anti-MYOD	Active Motif	39991	dilution 1:200
anti-MYOG	Santa Cruz	sc-576	dilution 1:150
anti-Pax7	Santa Cruz	sc-81648	dilution 1:100
anti-PDGFRα	Invitrogen	PA5-16571	dilution 1:50
b-FGF	Peprotech	450-33	concentration 4 ng/mL
bovine serum albumin (BSA) – used for digestion	Sigma Aldrich	A7906-1006	concentration 0.2%
BSA IgG-free, protease-free – used for staining	Jackson ImmunoResearch	001-000-162	concentration 5%
cell strainer 40 um	Dominique Dutscher	352340
cell strainer 70 um	Dominique Dutscher	352350
cell strainer 100 um	Dominique Dutscher	352360
Collagenase	Roche	10103586001	concentration 0.5 U/mL
Dimethyl sulfoxide (DMSO)	Euromedex	UD8050-05-A
Dispase	Roche	4942078001	concentration 3 U/mL
Dissection forceps size 5	Fine Science Tools	91150-20
Dissection forceps size 55	Fine Science Tools	11295-51
Dissection scissors (big, straight)	Fine Science Tools	9146-11	ideal for chopping
Dissection scissors (small, curved)	Fine Science Tools	15017-10
Dissection scissors (small, straight)	Fine Science Tools	14084-08
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)	ThermoFisher	41966-029
EdU Click-iT kit	ThermoFisher	C10340
Fetal bovine serum – option 1	Eurobio	CVF00-01
Fetal bovine serum – option 2	Gibco	10270-106
Matrigel	Corning Life Sciences	354234	coating solution
Parafilm	Dominique Dutscher	090261	flexible film
Penicillin streptomycin	Gibco	15140-122
Paraformaldehyde – option 1	PanReac AppliChem ITW Reagents	211511.1209	concentration 4%
Paraformaldeyde – option 2	ThermoFisher	28908	concentration 4%
Shaking water bath	ThermoFisher	TSSWB27
TritonX100	Sigma Aldrich	T8532-500 ML	concentration 0.5%
Wild-type mice	Janvier	C57BL/6NRj