نحن ممتنون لمركز وادزورث التابع لوزارة الصحة بولاية نيويورك لدعم هذا المشروع.

تمت الموافقة على البروتوكول التالي للاستخدام الأخلاقي للعينات البشرية من قبل مركز Wadsworth التابع لوزارة الصحة بولاية نيويورك لتطوير الفحص ، رقم الموافقة على البروتوكول # 03-019.
1. السلامة
<ol><li>ارتد معدات الحماية الشخصية (PPE) ، على الأقل لحماية العين (نظارات أو درع للوجه...

الكشف السريع والمبكر عن الأجسام المضادة لداء لتقييم الاستجابة المناعية لدى المريض

<ol>
	<li>Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+Techniques+in+Rabies.+Volume+1.">Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1.</a> World Health Organization. , 232-245 (2018).</li><li>Moore, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+of+rabies+serology:+defining+context+of+interpretation.">Challenges of rabies serology: defining context of interpretation.</a> Viruses. 13 (8), 1516 (2021).</li><li>Zajac, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+a+rabies+enzyme-linked+immunosorbent+assay+(ELISA)+targeting+IgM+and+IgG+in+human+sera.">Development and evaluation of a rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) targeting IgM and IgG in human sera.</a> Viruses. , 40-49 (2019).</li><li>Mills, D. J., Lau, C. L., Mills, C., Furuya-Kanamori, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+persistence+of+antibodies+and+boostability+after+rabies+intradermal+pre-exposure+prophylaxis.">Long-term persistence of antibodies and boostability after rabies intradermal pre-exposure prophylaxis.</a> Journal of Travel Medicine. 29 (2), (2022).</li><li>Ramakrishnan, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+50%+endpoint+titer+using+a+simple+formula.">Determination of 50% endpoint titer using a simple formula.</a> World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).</li><li>Rudd, R. J., Appler, K. A., Wong, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presence+of+cross-reactions+with+other+viral+encephalitides+in+the+indirect+fluorescent-antibody+test+for+diagnosis+of+rabies.">Presence of cross-reactions with other viral encephalitides in the indirect fluorescent-antibody test for diagnosis of rabies.</a> Journal of Clinical Microbiology. 51 (12), 4079-4082 (2013).</li><li>Fooks, A. R., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Rabies: scientific basis of the disease and its management. , (2020).</li><li>Paldanius, M., Bloigu, A., Leinonen, M., Saikku, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Chlamydia+pneumoniae-specific+immunoglobulin+A+(IgA)+antibodies+by+the+microimmunofluorescence+(MIF)+method:+comparison+of+seven+fluorescein-labeled+anti-human+IgA+conjugates+in+an+in-house+MIF+test+using+one+commercial+MIF+and+one+enzyme+immunoassay+kit.">Measurement of Chlamydia pneumoniae-specific immunoglobulin A (IgA) antibodies by the microimmunofluorescence (MIF) method: comparison of seven fluorescein-labeled anti-human IgA conjugates in an in-house MIF test using one commercial MIF and one enzyme immunoassay kit.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 8-12 (2003).</li><li>Rodriguez, M. C., Fontana, D., Garay, E., Prieto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantification+of+anti-rabies+glycoprotein+antibodies:+current+state+and+perspectives.">Detection and quantification of anti-rabies glycoprotein antibodies: current state and perspectives.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 105 (18), 6547-6557 (2021).</li><li>Katz, I. S. S., Guedes, F., Fernandes, E. R., Dos Ramos Silva, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+aspects+of+rabies:+a+literature+review.">Immunological aspects of rabies: a literature review.</a> Archives of Virology. 162 (1), 3251-3268 (2017).</li><li>Moore, S. M., Hanlon, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies-specific+antibodies:+measuring+surrogates+of+protection+against+a+fatal+disease.">Rabies-specific antibodies: measuring surrogates of protection against a fatal disease.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 4 (3), 595 (2010).</li></ol>

يستفيد اختبار IFA من مركب الأجسام المضادة للمستضد ، مما يسمح بموقع وضع العلامات لتصور الأجسام المضادة الخاصة بداء. يتم زرع خلايا الورم الأرومي العصبي أو خلايا BHK على شرائح مجهرية متعددة الآبار مغلفة ب PTFE ويتم تلقيحها بسلالة مختبر فيروس داء CVS-11. بمجرد أن تتلاقى الطبقة الأحادية وتصل الخلايا إ...

يستخدم اختبار الأجسام المضادة الفلورية غير المباشرة لداء (IFA) للكشف عن مختلف أنماط الأجسام المضادة الخاصة بداء في الأمصال أو السائل الدماغي الشوكي. وهو واحد من ترسانة من الاختبارات المتاحة لمراقبة مريض داء قبل الوفاة. من المفيد بشكل خاص للكشف المبكر عن الأجسام المضادة تقييم الاستجابة المناعية للمريض لعدوى داء. عند استخدامه بالاقتران مع اختبارات أخرى وتاريخ الحالة وحالة تطعيم المريض ، يمكن أن يساعد اختبار IFA في تحديد التعرض لفيروس داء أو اللقاح1. نظرا لأن اختبار IFA يقيس IgM و / أو IgG ، يمكن أن تشير قيم الجسم المضاد المحدد إلى إطار زمني تقريبي من التعرض للمستضد1. قد يكون هذا الاختبار مفيدا في التطبيقات المدرجة أو غيرها من التطبيقات التي لم يتم استكشافها بعد.
هناك العديد من المقايسات المصلية لداء المتاحة. اختبار تثبيط التركيز الفلوري السريع (RFFIT) ، أو اختبار تحييد فيروس الأجسام المضادة الفلورية (FAVN) ، أو تعديلات هذه هي الطرق الأساسية لقياس الأجسام المضادة المعادلة لفيروس داء (RVNAs) 1. ومع ذلك ، فإن هذه الاختبارات لا تفرق بين الأجسام المضادة IgM و IgG. عندما يكون التمييز بين النمط المتماثل للأجسام المضادة مهما في مراقبة الاستجابة المناعية لداء ، يتم استخدام اختبارات IFA لداء ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بإنزيم داء (ELISA) ، لكنها لا تقيس RVNAs. على الرغم من أنه يمكن استخدام اختبارات IFA و ELISA لتحديد وجود أجسام مضادة خاصة بداء في عينة ، إلا أن هناك بعض الاختلافات في كيفية تنفيذها. يستخدم اختبار IFA فيروسا حيا مستزرعا بالخلايا كركيزة مستضد ، بينما يستخدم ELISA النموذجي للكشف عن داء واحدا أو أكثر من البروتينات الفيروسية. في بيئة معملية حيث يمكن زراعة فيروس داء ، يمكن إجراء اختبار IFA بسهولة أكبر بدلا من شراء أو زراعة بروتينات فيروسية فردية ل ELISA. يجب مراعاة الغرض من الاختبار والمعلومات التي تم الحصول عليها من نتائج أي مقايسة مصلية لداء عند تحديد أيهما تختار2.
IgM هو أول من يستجيب ، ويزداد حتى يتم ملاحظة تبديل الفصل في حوالي اليوم 28 ، وعند هذه النقطة يصبح IgG الجسم المضاد السائدالمنتشر 3. وبالتالي ، لن يتوقع IgM إلا لفترة محدودة من الوقت بعد التعرض لفيروس داء أو التطعيم. يمكن أن يشير اختبار كل من المصل والسائل النخاعي (CSF) إلى ما إذا كان التعرض من خلال التطعيم ، حيث يمكن رؤية الأجسام المضادة فقط في الأمصال ، أو من عدوى فيروسية ، والتي من المحتمل أن تظهر أجساما مضادة في السائل الدماغي الشوكي1.
لقد ثبت أن الأجسام المضادة لداء تستمر لعدة سنوات بعد العلاج الوقائي قبل التعرض (PrEP)4. يمكن أن يكون اختبار IFA أداة مفيدة لإثبات ذلك في نقاط زمنية مختلفة بعد التطعيم أو التعرض.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>25x55mm glass cover slips</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Human IgG Labeled Conjugate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F9512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Human IgM Labeled Conjugate</td>
			<td>SeraCare</td>
			<td>5230-0286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirating pipette tip</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BHK-21 Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BION IFA Diluent</td>
			<td>MBL BION</td>
			<td>DIL-9993</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture water</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W3500</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin Jars</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent microscope with FITC filter</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7893</td>
			<td>Mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gullsorb IgM inactivation reagent</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-043-158</td>
			<td>IgG Inactivation Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G-7513</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum Essential Media Eagle &#8211; w/Earle&#8217;s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0643</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Neuroblastoma Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-well Teflon coating glass slides</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td>pH 7.6&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-3032</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>5100, 5500 or 6500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride crystals</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td>Mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile dropper</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9137</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma pre-set crystals pH 9.0</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9693</td>
			<td>Mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptose Phosphate Broth</td>
			<td>BD</td>
			<td>260300</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin mix</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6895</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of rabies igg and igm antibodies using the rabies indirect fluorescent antibody test

تم تطوير اختبار الأجسام المضادة الفلورية غير المباشرة لداء (IFA) للكشف عن مختلف أنماط الأجسام المضادة الخاصة بداء في الأمصال أو السائل الشوكي الدماغي. يوفر هذا الاختبار نتائج سريعة ويمكن استخدامه للكشف عن الأجسام المضادة لداء في عدة سيناريوهات مختلفة. يعد اختبار IFA لداء مفيدا بشكل خاص للكشف السريع والمبكر عن الأجسام المضادة لتقييم الاستجابة المناعية لدى المريض الذي أصيب بداء. على الرغم من أن الطرق الأخرى لتشخيص داء قبل الوفاة لها الأسبقية ، يمكن استخدام هذا الاختبار لإثبات التعرض الأخير لفيروس داء من خلال اكتشاف الأجسام المضادة. لا يوفر اختبار IFA عيار الأجسام المضادة المعادلة للفيروس (VNA) ، ولكن يمكن تقييم استجابة الوقاية قبل التعرض (PrEP) من خلال وجود الأجسام المضادة الإيجابية أو السلبية. يمكن استخدام هذا الاختبار في مواقف مختلفة ويمكن أن يوفر نتائج لعدد من الأهداف المختلفة. في هذه الدراسة ، استخدمنا العديد من عينات المصل المقترنة من الأفراد الذين تلقوا PrEP وأظهروا وجود الأجسام المضادة لداء بمرور الوقت باستخدام اختبار IFA.

The rabies indirect fluorescent antibody (IFA) test is used to detect various rabies-specific antibody isotypes in sera or cerebral spinal fluid. It is one of an arsenal of tests available for monitoring an antemortem rabies patient. It is especially useful for the early detection of antibodies to evaluate a patient's immune response to rabies infection. When used in conjunction with other tests, case history, and the patient's vaccination status, the IFA test can assist in determining exposure to rabies virus or a vaccine1. As the IFA test measures IgM and/or IgG, the values of the specific antibody can indicate an approximate time frame from exposure to the antigen1. This test may be useful in the listed applications or others not yet explored.
There are several rabies serological assays available. The rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT), fluorescent antibody virus neutralization (FAVN) test, or modifications of these are the primary methods for measuring rabies virus neutralizing antibodies (RVNAs)1. However, these tests do not differentiate IgM and IgG antibodies. When differentiating antibody isotype is important in monitoring the rabies immune response, the rabies IFA and the rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) tests are used, but they do not measure RVNAs. Although the IFA and ELISA tests can be used to determine the presence of rabies-specific antibodies in a sample, there are some differences in how they are executed. The IFA test utilizes a cell-cultured live virus as its antigen substrate, whereas a typical ELISA for rabies detection uses one or more of the viral proteins. In a laboratory setting where the rabies virus can be cultured, the IFA test may be more easily performed instead of purchasing or cultivating individual viral proteins for the ELISA. The purpose of testing and the information garnered from the results of any rabies serological assay should be considered when determining which to choose2.
IgM is the first to respond, increasing until class switching is observed at around day 28, at which point IgG becomes the predominant circulating antibody3. Hence, IgM would only be expected for a limited amount of time following exposure to rabies virus or vaccination. Testing both serum and cerebrospinal fluid (CSF) can indicate if the exposure was through vaccination, in which antibodies would be seen only in sera, or from a viral infection, which would potentially show antibodies in CSF1.
It has been established that rabies antibodies persist for several years following pre-exposure prophylaxis (PrEP)4. The IFA test can be a useful tool to demonstrate this at different time points following vaccination or exposure.

تسليط الضوء على المؤلف: الكشف عن الأنماط المتماثلة للأجسام المضادة الخاصة بداء في الأمصال أو السائل الشوكي الدماغي باستخدام اختبار IFA 

الكشف عن الأجسام المضادة لداء IgG و IgM باستخدام اختبار الأجسام المضادة الفلورية غير المباشرة لداء

The IFA test assesses antibody response during rabies infection or evaluates the immune response from vaccines. It can be used to establish antibody presence in a sample and distinguish which antibody isotypes are present. Neutralizing antibody assays are the gold standard for rabies antibody detection to assess antibody titer in a person who has received pre or post-exposure prophylaxis.Although an IFA test may yield different results than a neutralizing antibody assay, it can still provide valuable information when used as an alternative. Typically, assays that measure rabies neutralizing antibodies evaluate immune response. However, these tests take multiple days, requiring virus and live cell culture.The IFA test allows advanced preparation of antigen slides for testing with results in a few hours compared to days. Using the IFA tests in human rabies cases may lead to more answers about how an individual's immune system responds to rabies infection. There is great variation amongst cases, and this test can provide results in a real-time manner during the disease.

تم جمع جميع عينات المصل من المرضى في نفس الأطر الزمنية تقريبا بعد PrEP. تم اختبار العينات من خمسة مرضى مختلفين في النقاط الزمنية التالية: أسبوعان بعد التطعيم النهائي ضد لقاح داء ، و 6 أشهر بعد سلسلة لقاح داء ، و 18 شهرا بعد سلسلة لقاح داء. تم تخفيف كل عينة مصل في سلسلة وتصنيفها لكل من وجود IgM و IgG ،...

Watch this Scientific Journal Video about Rabies-Specific Antibody Isotypes Detection in Sera or Cerebral Spinal Fluid Using an IFA Test at JoVE.com

الهدف من هذه المخطوطة هو فحص استخدام اختبار الأجسام المضادة الفلورية غير المباشرة لداء للكشف عن الأجسام المضادة IgG و IgM الخاصة بداء.

The rabies indirect fluorescent antibody (IFA) test was developed to detect various rabies-specific antibody isotypes in sera or cerebral spinal fluid. ...

يقيم اختبار IFA استجابة الأجسام المضادة أثناء الإصابة بداء أو يقيم الاستجابة المناعية للقاحات. يمكن استخدامه لتحديد وجود الأجسام المضادة في عينة وتمييز الأنماط المتماثلة للأجسام المضادة الموجودة. مقايسات الأجسام المضادة المعادلة هي المعيار الذهبي للكشف عن الأجسام المضادة لداء لتقييم عيار الأجسام المضادة في الشخص الذي تلقى الوقاية قبل أو بعد التعرض.على الرغم من أن اختبار IFA قد يسفر عن نتائج مختلفة عن مقايسة الأجسام المضادة المعادلة ، إلا أنه لا يزال بإمكانه توفير معلومات قيمة عند استخدامه كبديل. عادة ، تقوم المقايسات التي تقيس الأجسام المضادة المعادلة لداء بتقييم الاستجابة المناعية. ومع ذلك ، تستغرق هذه الاختبارات عدة أيام ، وتتطلب زراعة الفيروسات والخلايا الحية.يسمح اختبار IFA بالتحضير المتقدم لشرائح المستضد للاختبار مع النتائج في غضون ساعات قليلة مقارنة بالأيام. قد يؤدي استخدام اختبارات IFA في حالات داء البشري إلى مزيد من الإجابات حول كيفية استجابة الجهاز المناعي للفرد لعدوى داء. هناك تباين كبير بين الحالات ، ويمكن أن يوفر هذا الاختبار نتائج في الوقت الفعلي أثناء المرض.

الكشف عن الأجسام المضادة لداء IgG و IgM باستخدام اختبار الأجسام المضادة الفلورية غير المباشرة لداء

Abstract