A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
מטרת כתב היד היא לבחון את השימוש בבדיקת נוגדנים פלואורסצנטיים עקיפים לכלבת לאיתור נוגדנים ספציפיים לכלבת מסוג IgG ו-IgM.
בדיקת נוגדנים פלואורסצנטיים עקיפים לכלבת (IFA) פותחה כדי לאתר איזוטיפים שונים של נוגדנים ספציפיים לכלבת בסרה או בנוזל השדרה המוחי. בדיקה זו מספקת תוצאות מהירות וניתן להשתמש בה כדי לזהות נוגדנים לכלבת במספר תרחישים שונים. בדיקת IFA לכלבת שימושית במיוחד לגילוי מהיר ומוקדם של נוגדנים להערכת התגובה החיסונית בחולה שחלה בכלבת. למרות ששיטות אחרות לאבחון כלבת לפני המוות מקבלות עדיפות, ניתן להשתמש בבדיקה זו כדי להדגים את החשיפה האחרונה לנגיף הכלבת באמצעות זיהוי נוגדנים. בדיקת IFA אינה מספקת נוגדנים מנטרלי וירוסים (VNA), אך ניתן להעריך את התגובה המונעת לפני חשיפה (PrEP) באמצעות נוכחות נוגדנים חיובית או שלילית. בדיקה זו יכולה לשמש במצבים שונים ויכולה לספק תוצאות למספר מטרות שונות. במחקר זה, השתמשנו במספר דגימות סרום מזווג מאנשים שקיבלו PrEP והדגמנו את נוכחות נוגדני הכלבת שלהם לאורך זמן באמצעות בדיקת IFA.
בדיקת נוגדנים פלואורסצנטיים עקיפים לכלבת (IFA) משמשת לאיתור איזוטיפים שונים של נוגדנים ספציפיים לכלבת בסרה או בנוזל השדרה המוחי. זהו אחד מארסנל של בדיקות זמינות למעקב אחר חולה כלבת לפני המוות. זה שימושי במיוחד עבור גילוי מוקדם של נוגדנים כדי להעריך את התגובה החיסונית של המטופל לזיהום כלבת. כאשר נעשה בה שימוש בשילוב עם בדיקות אחרות, היסטוריית מקרים וסטטוס החיסון של המטופל, בדיקת IFA יכולה לסייע בקביעת חשיפה לנגיף הכלבת או חיסון1. מכיוון שבדיקת IFA מודדת IgM ו/או IgG, ערכי הנוגדן הספציפי יכולים להצביע על מסגרת זמן משוערת מחשיפה לאנטיגן1. בדיקה זו עשויה להיות שימושית ביישומים המפורטים או ביישומים אחרים שעדיין לא נחקרו.
....הפרוטוקול הבא אושר לשימוש אתי בדגימות אנושיות על ידי מחלקת הבריאות של מדינת ניו יורק מרכז וודסוורת' לפיתוח מבחנים, מספר אישור פרוטוקול #03-019.
1. בטיחות
כל דגימות הסרום נאספו מהמטופלים בערך באותן מסגרות זמן לאחר PrEP. הדגימות נבדקו מחמישה חולים שונים בנקודות הזמן הבאות: שבועיים לאחר החיסון הסופי נגד כלבת, 6 חודשים לאחר סדרת חיסוני הכלבת ו-18 חודשים לאחר סדרת חיסוני הכלבת. כל דגימת סרום דוללה בסדרות ודורגה הן עבור נוכחות IgM והן עבור נוכחות IgG, כמ.......
בדיקת IFA מנצלת קומפלקס נוגדנים אנטיגן, המאפשר אתר תיוג כדי להמחיש נוגדנים ספציפיים לכלבת. תאי נוירובלסטומה או BHK נזרעים על שקופיות מיקרוסקופ מרובות בארות מצופות PTFE ומחוסנים בזן מעבדה של נגיף הכלבת CVS-11. ברגע שהחד-שכבה מתמזגת והתאים מגיעים להדבקה הרצויה של כ-50%, השקופיות מאוחסנות עד שהן מוכנ?.......
אנו אסירי תודה למרכז וודסוורת' של מחלקת הבריאות של מדינת ניו יורק על תמיכתו בפרויקט זה.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
25x55mm glass cover slips | Any | ||
Acetone | Any | ||
Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
Aspirating pipette tip | Any | ||
BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
Coplin Jars | Any | ||
Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
PBS | Any | pH 7.6 | |
Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
Sterile dropper | Any | ||
Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved