基于细胞的自噬相关 4B 半胱氨酸肽酶抑制剂的药物筛选

越来越多的证据表明，高自噬通量与肿瘤进展和癌症治疗耐药性有关。测定单个自噬蛋白是针对该途径的治疗策略的先决条件。抑制自噬蛋白酶ATG4B已被证明可以增加总生存期，这表明ATG4B可能是癌症治疗的潜在药物靶点。我们的实验室开发了一种基于荧光素酶的选择性检测方法，用于监测细胞中的ATG4B活性。对于该测定，ATG4B 的底物 LC3B 在 C 末端用来自海洋桡足类 Gaussia princeps （GLUC） 的可分泌荧光素酶标记。该报告基因与肌动蛋白细胞骨架相连，因此在未解脱时将其保留在细胞的细胞质中。ATG4B 介导的裂解导致非常规分泌释放 GLUC，然后可以通过从细胞培养物中收获上清液作为细胞 ATG4B 活性的相关性来监测。本文介绍了这种基于荧光素酶的检测方法对自动化高通量筛选的适应。我们描述了细胞ATG4B活性的示例性高通量分析的工作流程和优化。