ヒト末梢リンパ球におけるγH2AXと53BP1の二重免疫蛍光法

二本鎖切断(DSB)は、細胞核に発生する可能性のある最も重篤な病変の1つであり、修復されない場合、癌を含む重篤な結果につながる可能性があります。したがって、細胞はDSBを修復するための複雑なメカニズムを備えており、これらの経路には、Ser-139(すなわちγH2AX)およびp53結合タンパク質1(53BP1)のリン酸化形態のヒストンH2AXが含まれます。両方のタンパク質はDSBの部位で病巣を形成する可能性があるため、これらのマーカーの同定は、DSBとその修復速度論の両方を研究するのに適した方法と考えられています。γH2AXと53BP1病巣の形成につながる分子プロセスによると、2つのDNA損傷マーカーを同時に検出することによってDSBを定量できる代替アプローチを設定するために、DSB付近でのそれらの共局在を調べることがより有用である可能性があります。したがって、このプロトコルは、二重免疫蛍光におけるγH2AXおよび53BP1病巣の存在を介して、放射線模倣剤ブレオマイシンによってヒトリンパ球に誘導されるゲノム損傷を評価することを目的としています。この方法論を用いて、ブレオマイシン誘発性DSBの修復動態を研究する予備的な試みとして、γH2AXと53BP1病巣の数の経時的な変化も明らかにしました。