Un ensayo de microplacas basado en densidad óptica adaptado para caracterizar la infección por actinobacteriófagos

Los bacteriófagos son una parte clave de los entornos naturales, y tienen una poderosa capacidad para dar forma a las poblaciones bacterianas. Para comprender cómo los fagos individuales interactúan con huéspedes bacterianos de crecimiento lento, como los actinomicetos, se necesita un método fácil y confiable para cuantificar el crecimiento bacteriano a largo plazo en presencia de fagos. Los lectores espectrofotométricos de microplacas permiten mediciones repetidas de alto rendimiento, pero incubar un volumen pequeño durante un tiempo prolongado puede presentar desafíos técnicos. Este procedimiento adapta una microplaca estándar de 96 pocillos para permitir el cocultivo de fagos y bacterias sin submuestreo durante 96 h, con el crecimiento bacteriano registrado cada 8 h utilizando valores de absorbancia espectrofotométrica. Estos valores de densidad óptica se analizan utilizando R para obtener métricas de infección, incluido el porcentaje de inhibición del crecimiento, la virulencia relativa y el índice de Stacy-Ceballos. Los métodos descritos aquí proporcionan una forma efectiva de realizar y analizar experimentos de curva de crecimiento de microplacas de duración prolongada e incluyen modificaciones para reducir la evaporación y la condensación de la tapa. Estos protocolos facilitan los ensayos basados en microplacas de las interacciones entre los huéspedes bacterianos de crecimiento lento y sus bacteriófagos.