JoVE Logo

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Abstract

Medicine

قياس التنفس عالي الدقة لتقييم وظيفة الميتوكوندريا في الحيوانات المنوية البشرية

Published: June 23rd, 2023

DOI:

10.3791/65493

1Departamento de Histología y Embriología, Unidad Académica Histología y Embriología, 2Departamento de Bioquímica, Unidad Académica Bioquímica, 3Centro de Investigaciones Biomédicas (CEINBIO), Facultad de Medicina, Universidad de la República

ERRATUM NOTICE

Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …

Abstract

غالبا ما تتم دراسة جودة السائل المنوي عن طريق تحليل السائل المنوي الروتيني ، وهو وصفي وغالبا ما يكون غير حاسم. يرتبط العقم عند الذكور بنشاط الميتوكوندريا للحيوانات المنوية المتغيرة ، وبالتالي فإن قياس وظيفة الميتوكوندريا للحيوانات المنوية هو مؤشر على جودة الحيوانات المنوية. قياس التنفس عالي الدقة هو طريقة لقياس استهلاك الأكسجين للخلايا أو الأنسجة في نظام الغرفة المغلقة. يمكن تنفيذ هذه التقنية لقياس التنفس في الحيوانات المنوية البشرية وتوفر معلومات حول جودة وسلامة الميتوكوندريا المنوية. يسمح قياس التنفس عالي الدقة للخلايا بالتحرك بحرية ، وهي ميزة مسبقة في حالة الحيوانات المنوية. يمكن تطبيق هذه التقنية مع الحيوانات المنوية السليمة أو المتداخلة وتسمح بدراسة وظيفة الميتوكوندريا المنوية السليمة ونشاط مجمعات السلسلة التنفسية الفردية. تستخدم أداة oxygraph عالية الدقة أجهزة استشعار لقياس تركيز الأكسجين إلى جانب برامج حساسة لحساب استهلاك الأكسجين. تستخدم البيانات لحساب مؤشرات الجهاز التنفسي بناء على نسب استهلاك الأكسجين. وبالتالي ، فإن المؤشرات هي نسب معدلين لاستهلاك الأكسجين ويتم تطبيعها داخليا إلى عدد الخلايا أو كتلة البروتين. مؤشرات الجهاز التنفسي هي مؤشر على وظيفة الميتوكوندريا المنوية والخلل الوظيفي.

Erratum

Erratum: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa

An erratum was issued for: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa. The Protocol and Representative Result sections were updated.

Step 2.4.12 of the Protocol was updated from:

Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex II inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.

to:

Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex III inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.

Figure 3 in the Representative Results section was updated from:

Figure 3
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.

to:

Figure 3
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.

Explore More Videos

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved