A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Abstract
Medicine
Respirometrie met hoge resolutie om de mitochondriale functie in menselijke spermatozoa te beoordelen
ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …Abstract
De kwaliteit van het sperma wordt vaak bestudeerd door middel van routinematige sperma-analyse, die beschrijvend en vaak niet doorslaggevend is. Mannelijke onvruchtbaarheid wordt in verband gebracht met veranderde mitochondriale activiteit van het sperma, dus de meting van de mitochondriale functie van het sperma is een indicator van de kwaliteit van het sperma. Respirometrie met hoge resolutie is een methode om het zuurstofverbruik van cellen of weefsels in een gesloten kamersysteem te meten. Deze techniek kan worden toegepast om de ademhaling in menselijk sperma te meten en geeft informatie over de kwaliteit en integriteit van de mitochondriën van het sperma. Respirometrie met hoge resolutie zorgt ervoor dat de cellen vrij kunnen bewegen, wat a priori een voordeel is in het geval van sperma. Deze techniek kan worden toegepast met intacte of gepermeabiliseerde spermatozoa en maakt de studie mogelijk van de mitochondriale functie van intact sperma en de activiteit van individuele ademhalingsketencomplexen. Het oxygraafinstrument met hoge resolutie maakt gebruik van sensoren om de zuurstofconcentratie te meten in combinatie met gevoelige software om het zuurstofverbruik te berekenen. De gegevens worden gebruikt om ademhalingsindexen te berekenen op basis van de zuurstofverbruiksratio's. Bijgevolg zijn de indices de verhoudingen van twee zuurstofverbruikssnelheden en worden ze intern genormaliseerd naar het celaantal of de eiwitmassa. De respiratoire indices zijn een indicator van de mitochondriale functie en disfunctie van het sperma.
Erratum
Erratum: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human SpermatozoaAn erratum was issued for: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa. The Protocol and Representative Result sections were updated.
Step 2.4.12 of the Protocol was updated from:
Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex II inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.
to:
Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex III inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.
Figure 3 in the Representative Results section was updated from:
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.
Explore More Videos
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved