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Abstract
Medicine
Respirométrie à haute résolution pour évaluer la fonction mitochondriale chez les spermatozoïdes humains
ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …Abstract
La qualité du sperme est souvent étudiée par une analyse de routine du sperme, qui est descriptive et souvent peu concluante. L’infertilité masculine est associée à une altération de l’activité mitochondriale des spermatozoïdes, de sorte que la mesure de la fonction mitochondriale des spermatozoïdes est un indicateur de la qualité du sperme. La respirométrie à haute résolution est une méthode de mesure de la consommation d’oxygène des cellules ou des tissus dans un système à chambre fermée. Cette technique peut être mise en œuvre pour mesurer la respiration dans les spermatozoïdes humains et fournit des informations sur la qualité et l’intégrité des mitochondries des spermatozoïdes. La respirométrie à haute résolution permet aux cellules de se déplacer librement, ce qui est un avantage a priori dans le cas des spermatozoïdes. Cette technique peut être appliquée avec des spermatozoïdes intacts ou perméabilisés et permet d’étudier la fonction mitochondriale intacte des spermatozoïdes et l’activité des complexes de chaînes respiratoires individuels. L’instrument oxygraphe haute résolution utilise des capteurs pour mesurer la concentration d’oxygène couplés à un logiciel sensible pour calculer la consommation d’oxygène. Les données sont utilisées pour calculer les indices respiratoires en fonction des ratios de consommation d’oxygène. Par conséquent, les indices sont les proportions de deux taux de consommation d’oxygène et sont normalisés en interne au nombre de cellules ou à la masse protéique. Les indices respiratoires sont un indicateur de la fonction et du dysfonctionnement des mitochondries des spermatozoïdes.
Erratum
Erratum: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human SpermatozoaAn erratum was issued for: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa. The Protocol and Representative Result sections were updated.
Step 2.4.12 of the Protocol was updated from:
Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex II inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.
to:
Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex III inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.
Figure 3 in the Representative Results section was updated from:
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.
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