JoVE Logo

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Abstract

Medicine

רספירומטריה ברזולוציה גבוהה להערכת תפקוד המיטוכונדריה בזרעונים אנושיים

Published: June 23rd, 2023

DOI:

10.3791/65493

1Departamento de Histología y Embriología, Unidad Académica Histología y Embriología, 2Departamento de Bioquímica, Unidad Académica Bioquímica, 3Centro de Investigaciones Biomédicas (CEINBIO), Facultad de Medicina, Universidad de la República

ERRATUM NOTICE

Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …

Abstract

איכות הזרע נלמדת לעתים קרובות על ידי ניתוח זרע שגרתי, שהוא תיאורי ולעתים קרובות לא חד משמעי. אי פוריות הגבר קשורה לשינוי בפעילות המיטוכונדריה של הזרע, ולכן מדידת תפקוד המיטוכונדריה של הזרע היא אינדיקטור לאיכות הזרע. רספירומטריה ברזולוציה גבוהה היא שיטה למדידת צריכת החמצן של תאים או רקמות במערכת תא סגור. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת כדי למדוד נשימה בזרע אנושי ומספקת מידע על האיכות והשלמות של מיטוכונדריית הזרע. ספירומטריה ברזולוציה גבוהה מאפשרת לתאים לנוע בחופשיות, וזה יתרון מראש במקרה של זרע. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת עם זרעונים שלמים או חדירים, ומאפשרת ללמוד את תפקוד המיטוכונדריה של זרע שלם ואת הפעילות של מתחמי שרשרת נשימה בודדים. מכשיר האוקסיגרף ברזולוציה גבוהה משתמש בחיישנים כדי למדוד את ריכוז החמצן יחד עם תוכנה רגישה כדי לחשב את צריכת החמצן. הנתונים משמשים לחישוב מדדי נשימה המבוססים על יחסי צריכת החמצן. כתוצאה מכך, המדדים הם הפרופורציות של שני שיעורי צריכת חמצן והם מנורמלים פנימית למספר התא או מסת החלבון. מדדי הנשימה הם אינדיקטור לתפקוד מיטוכונדריאלי זרע ולתפקוד לקוי.

Erratum

Erratum: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa

An erratum was issued for: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa. The Protocol and Representative Result sections were updated.

Step 2.4.12 of the Protocol was updated from:

Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex II inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.

to:

Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex III inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.

Figure 3 in the Representative Results section was updated from:

Figure 3
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.

to:

Figure 3
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.

Explore More Videos

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved