JoVE Logo

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Abstract

Medicine

मानव शुक्राणु में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का आकलन करने के लिए उच्च-रिज़ॉल्यूशन श्वसन मिथुमी

Published: June 23rd, 2023

DOI:

10.3791/65493

1Departamento de Histología y Embriología, Unidad Académica Histología y Embriología, 2Departamento de Bioquímica, Unidad Académica Bioquímica, 3Centro de Investigaciones Biomédicas (CEINBIO), Facultad de Medicina, Universidad de la República

ERRATUM NOTICE

Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …

Abstract

वीर्य की गुणवत्ता का अध्ययन अक्सर नियमित वीर्य विश्लेषण द्वारा किया जाता है, जो वर्णनात्मक और अक्सर अनिश्चित होता है। पुरुष बांझपन परिवर्तित शुक्राणु माइटोकॉन्ड्रियल गतिविधि से जुड़ा हुआ है, इसलिए शुक्राणु माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का माप शुक्राणु की गुणवत्ता का एक संकेतक है। उच्च-रिज़ॉल्यूशन श्वसनमिति एक बंद-कक्ष प्रणाली में कोशिकाओं या ऊतकों की ऑक्सीजन की खपत को मापने की एक विधि है। इस तकनीक को मानव शुक्राणु में श्वसन को मापने के लिए लागू किया जा सकता है और शुक्राणु माइटोकॉन्ड्रिया की गुणवत्ता और अखंडता के बारे में जानकारी प्रदान करता है। उच्च-रिज़ॉल्यूशन श्वासरोमिति कोशिकाओं को स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित करने की अनुमति देती है, जो शुक्राणु के मामले में एक प्राथमिक लाभ है। इस तकनीक को बरकरार या परमेबिलाइज्ड शुक्राणु के साथ लागू किया जा सकता है और बरकरार शुक्राणु माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और व्यक्तिगत श्वसन श्रृंखला परिसरों की गतिविधि के अध्ययन की अनुमति देता है। उच्च-रिज़ॉल्यूशन ऑक्सीग्राफ उपकरण ऑक्सीजन की खपत की गणना करने के लिए संवेदनशील सॉफ्टवेयर के साथ युग्मित ऑक्सीजन एकाग्रता को मापने के लिए सेंसर का उपयोग करता है। डेटा का उपयोग ऑक्सीजन खपत अनुपात के आधार पर श्वसन सूचकांक की गणना करने के लिए किया जाता है। नतीजतन, सूचकांक दो ऑक्सीजन खपत दरों के अनुपात हैं और आंतरिक रूप से सेल संख्या या प्रोटीन द्रव्यमान के लिए सामान्यीकृत हैं। श्वसन सूचकांक शुक्राणु माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और शिथिलता का एक संकेतक हैं।

Erratum

Erratum: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa

An erratum was issued for: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa. The Protocol and Representative Result sections were updated.

Step 2.4.12 of the Protocol was updated from:

Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex II inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.

to:

Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex III inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.

Figure 3 in the Representative Results section was updated from:

Figure 3
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.

to:

Figure 3
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.

Explore More Videos

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved