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Abstract

Medicine

인간 정자의 미토콘드리아 기능을 평가하기 위한 고분해능 호흡 측정법

Published: June 23rd, 2023

DOI:

10.3791/65493

1Departamento de Histología y Embriología, Unidad Académica Histología y Embriología, 2Departamento de Bioquímica, Unidad Académica Bioquímica, 3Centro de Investigaciones Biomédicas (CEINBIO), Facultad de Medicina, Universidad de la República

ERRATUM NOTICE

Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …

Abstract

정액의 질은 종종 일상적인 정액 분석을 통해 연구되며, 이는 설명적이며 종종 결정적이지 않습니다. 남성 불임은 정자 미토콘드리아 활동의 변화와 관련이 있으므로 정자 미토콘드리아 기능의 측정은 정자의 질을 나타내는 지표입니다. 고분해능 호흡 측정법은 밀폐 챔버 시스템에서 세포 또는 조직의 산소 소비량을 측정하는 방법입니다. 이 기술은 인간 정자의 호흡을 측정하기 위해 구현될 수 있으며 정자 미토콘드리아의 품질과 무결성에 대한 정보를 제공합니다. 고해상도 호흡 측정법은 세포가 자유롭게 움직일 수 있도록 하며, 이는 정자의 경우 선험적 이점입니다. 이 기술은 온전하거나 투과된 정자와 함께 적용할 수 있으며 온전한 정자 미토콘드리아 기능과 개별 호흡 사슬 복합체의 활성을 연구할 수 있습니다. 고분해능 산소 그래프 기기는 센서를 사용하여 산소 농도를 측정하고 민감한 소프트웨어와 함께 산소 소비량을 계산합니다. 이 데이터는 산소 소비 비율을 기반으로 호흡 지수를 계산하는 데 사용됩니다. 결과적으로, 지수는 두 산소 소비율의 비율이며 내부적으로 세포 수 또는 단백질 질량으로 정규화됩니다. 호흡 지수는 정자 미토콘드리아 기능과 기능 장애를 나타내는 지표입니다.

Erratum

Erratum: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa

An erratum was issued for: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa. The Protocol and Representative Result sections were updated.

Step 2.4.12 of the Protocol was updated from:

Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex II inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.

to:

Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex III inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.

Figure 3 in the Representative Results section was updated from:

Figure 3
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.

to:

Figure 3
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.

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