A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Abstract
Medicine
Høyoppløselig respirometri for å vurdere mitokondriell funksjon i humane spermatozoer
ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …Abstract
Sædkvalitet studeres ofte ved rutinemessig sædanalyse, som er beskrivende og ofte mangelfull. Mannlig infertilitet er assosiert med endret sperm mitokondriell aktivitet, så måling av sperm mitokondriell funksjon er en indikator på sædkvalitet. Høyoppløselig respirometri er en metode for å måle oksygenforbruket til celler eller vev i et lukket kammersystem. Denne teknikken kan implementeres for å måle respirasjon i menneskelig sæd og gir informasjon om kvaliteten og integriteten til sædmitokondriene. Høyoppløselig respirometri gjør at cellene kan bevege seg fritt, noe som er en a priori fordel når det gjelder sædceller. Denne teknikken kan brukes med intakte eller permeabiliserte spermatozoer og muliggjør studier av intakt sæd, mitokondriell funksjon og aktiviteten til individuelle respiratoriske kjedekomplekser. Det høyoppløselige oksygrafinstrumentet bruker sensorer til å måle oksygenkonsentrasjonen kombinert med sensitiv programvare for å beregne oksygenforbruket. Dataene brukes til å beregne respiratoriske indekser basert på oksygenforbruksforholdene. Følgelig er indeksene proporsjonene av to oksygenforbrukshastigheter og er internt normalisert til cellenummer eller proteinmasse. Respiratoriske indekser er en indikator på sperm, mitokondriell funksjon og dysfunksjon.
Erratum
Erratum: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human SpermatozoaAn erratum was issued for: High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa. The Protocol and Representative Result sections were updated.
Step 2.4.12 of the Protocol was updated from:
Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex II inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.
to:
Finally, inject 1 µL of 5 mM antimycin A (2.5 µM final concentration). This is a complex III inhibitor to discriminate between the mitochondrial and residual oxygen consumption (non-mitochondrial respiration). For the analysis of complex I, add 1 µL of 1 mM rotenone (0.5 µM final concentration), an inhibitor of this complex, instead of AA. Measure the oxygen consumption until the signal decreases and stabilizes.
Figure 3 in the Representative Results section was updated from:
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 3: Determination of the optimal concentration of digitonin for the permeabilization of human sperm cells. The respiration rates were measured at 37 °C in MRM medium with glutamate, malate, and adenosine diphosphate. (A) Representative respiratory trace. The blue line is the O2 concentration, and the red line represents the O2 flow per volume correlated. (B) Mitochondria respiration rate means ± standard error, n = 4. The red arrow represents the optimal concentration. Abbreviation: dig = digitonin. Please click here to view a larger version of this figure.
Explore More Videos
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved