Een valideerbare druppel digitale polymerasekettingreactietest voor de detectie van adeno-geassocieerde virale vectoren in biosheddingstudies van tranen

Het gebruik van virale vectoren voor de behandeling van genetische ziekten is de afgelopen jaren aanzienlijk toegenomen, met meer dan 2.000 studies die tot nu toe zijn geregistreerd. Adeno-geassocieerde virale (AAV) vectoren hebben bijzonder succes gevonden bij de behandeling van ooggerelateerde ziekten, zoals geïllustreerd door de goedkeuring van voretigene neparvovec-rzyl. Om nieuwe therapieën op de markt te brengen, vragen regelgevende instanties doorgaans om gekwalificeerde of gevalideerde biosheddingstudies om de afgifte van de vector in het milieu te evalueren. Er zijn echter geen officiële richtlijnen voor de ontwikkeling van moleculaire testen ter ondersteuning van dergelijke afscheidingsstudies vrijgegeven door de Food and Drug Administration van de Verenigde Staten, waardoor ontwikkelaars zelf de beste praktijken kunnen bepalen. Het doel van dit protocol is om een valideerbaar protocol te presenteren voor de detectie van AAV-vectoren in menselijke tranen door druppel digitale polymerasekettingreactie (ddPCR) ter ondersteuning van klinische biosheddingstudies. Dit manuscript bespreekt de huidige industriële benaderingen van moleculaire assayvalidatie en toont aan dat de methode de acceptatiecriteria voor doeltests overschrijdt die momenteel in white papers worden voorgesteld. Ten slotte worden stappen besproken die van cruciaal belang zijn voor de prestaties van elke ddPCR-test, ongeacht de toepassing.