Ein validierbarer digitaler Tröpfchen-Polymerase-Kettenreaktions-Assay für den Nachweis von Adeno-assoziierten viralen Vektoren in Bioshedding-Studien an Tränen

Der Einsatz von viralen Vektoren zur Behandlung genetischer Krankheiten hat in den letzten Jahren erheblich zugenommen, mit bisher über 2.000 registrierten Studien. Adeno-assoziierte virale (AAV) Vektoren haben besondere Erfolge bei der Behandlung von Augenerkrankungen erzielt, wie die Zulassung von Voretigene Neparvovec-rzyl zeigt. Um neue Therapien auf den Markt zu bringen, verlangen die Zulassungsbehörden in der Regel qualifizierte oder validierte Bioshedding-Studien, um die Freisetzung des Vektors in die Umwelt zu bewerten. Die United States Food and Drug Administration hat jedoch keine offiziellen Richtlinien für die Entwicklung molekularer Assays zur Unterstützung solcher Shedding-Studien veröffentlicht, so dass die Entwickler die Best Practices für sich selbst bestimmen müssen. Ziel dieses Protokolls ist es, ein validierbares Protokoll für den Nachweis von AAV-Vektoren in menschlichen Tränen mittels digitaler Polymerase-Kettenreaktion (ddPCR) zur Unterstützung klinischer Bioshedding-Studien zu präsentieren. Dieses Manuskript diskutiert aktuelle Industrieansätze zur Validierung molekularer Assays und zeigt, dass die Methode die derzeit in White Papers vorgeschlagenen Akzeptanzkriterien für Zielassays übertrifft. Abschließend werden Schritte erörtert, die für die Durchführung eines ddPCR-Assays entscheidend sind, unabhängig von der Anwendung.