Un saggio di reazione a catena della polimerasi digitale a goccia validabile per la rilevazione di vettori virali adeno-associati negli studi di bioshedding delle lacrime

L'uso di vettori virali per il trattamento di malattie genetiche è aumentato notevolmente negli ultimi anni, con oltre 2.000 studi registrati fino ad oggi. I vettori virali adeno-associati (AAV) hanno riscontrato particolare successo nel trattamento delle malattie correlate agli occhi, come esemplificato dall'approvazione di voretigene neparvovec-rzyl. Per portare nuove terapie sul mercato, le agenzie regolatorie in genere richiedono studi di bioshedding qualificati o convalidati per valutare il rilascio del vettore nell'ambiente. Tuttavia, nessuna linea guida ufficiale per lo sviluppo di saggi a base molecolare a supporto di tali studi di spargimento è stata rilasciata dalla Food and Drug Administration degli Stati Uniti, lasciando agli sviluppatori di determinare le migliori pratiche per se stessi. Lo scopo di questo protocollo è quello di presentare un protocollo validabile per la rilevazione di vettori AAV in lacrime umane mediante reazione a catena della polimerasi digitale a goccia (ddPCR) a supporto di studi clinici di bioshedding. Questo manoscritto discute gli attuali approcci industriali alla convalida dei saggi molecolari e dimostra che il metodo supera i criteri di accettazione del test target attualmente proposti nei white paper. Infine, vengono discussi i passaggi critici nell'esecuzione di qualsiasi test ddPCR, indipendentemente dall'applicazione.