눈물의 바이오셰딩 연구에서 아데노 관련 바이러스 벡터의 검출을 위한 검증 가능한 액적 디지털 중합효소 연쇄 반응 분석

유전 질환을 치료하기 위한 바이러스 벡터의 사용은 최근 몇 년 동안 크게 증가했으며 현재까지 2,000건 이상의 연구가 등록되었습니다. 아데노 관련 바이러스(AAV) 벡터는 voretigene neparvovec-rzyl의 승인에 의해 예시된 바와 같이 눈 관련 질병의 치료에서 특별한 성공을 발견했습니다. 새로운 치료법을 시장에 출시하기 위해 규제 기관은 일반적으로 벡터가 환경으로 방출되는 것을 평가하기 위해 적격하거나 검증된 바이오쉐딩 연구를 요청합니다. 그러나 미국 식품의약국(FDA)은 이러한 흘리기 연구를 지원하기 위한 분자 기반 분석 개발에 대한 공식 지침을 발표하지 않았으므로 개발자가 스스로 모범 사례를 결정해야 합니다. 이 프로토콜의 목적은 임상 바이오쉐딩 연구를 지원하기 위해 액적 디지털 중합효소 연쇄 반응(ddPCR)에 의해 인간 눈물에서 AAV 벡터를 검출하기 위한 검증 가능한 프로토콜을 제시하는 것입니다. 이 원고는 분자 분석 검증에 대한 현재 업계의 접근 방식에 대해 논의하고 이 방법이 현재 백서에서 제안된 표적 분석 허용 기준을 초과함을 보여줍니다. 마지막으로, 응용 분야에 관계없이 모든 ddPCR 분석의 성능에 중요한 단계에 대해 설명합니다.