En validerbar dråpe digital polymerasekjedereaksjonsanalyse for påvisning av adeno-assosierte virale vektorer i bioshedding studier av tårer

Bruken av virale vektorer for å behandle genetiske sykdommer har økt betydelig de siste årene, med over 2000 studier registrert til dags dato. Adeno-associated viral (AAV) vektorer har funnet særlig suksess i behandlingen av øyerelaterte sykdommer, som eksemplifisert ved godkjenning av voretigene neparvovec-rzyl. For å bringe nye terapier til markedet, ber reguleringsorganer vanligvis om kvalifiserte eller validerte biosheddingstudier for å evaluere frigjøring av vektoren i miljøet. Imidlertid har ingen offisielle retningslinjer for utvikling av molekylære baserte analyser for å støtte slike shedding studier blitt utgitt av USA Food and Drug Administration, slik at utviklere kan bestemme beste praksis for seg selv. Formålet med denne protokollen er å presentere en validerbar protokoll for påvisning av AAV-vektorer i humane rifter ved dråpedigital polymerasekjedereaksjon (ddPCR) til støtte for kliniske biosheddingstudier. Dette manuskriptet diskuterer dagens industrielle tilnærminger til molekylær analysevalidering og demonstrerer at metoden overgår akseptkriteriene for målanalysen som for tiden foreslås i hvitbøker. Til slutt diskuteres trinn som er kritiske i utførelsen av enhver ddPCR-analyse, uavhengig av applikasjon.