Валидируемый анализ капельной цифровой полимеразной цепной реакции для обнаружения аденоассоциированных вирусных векторов в исследованиях биопролития слез

Использование вирусных векторов для лечения генетических заболеваний значительно возросло в последние годы, и на сегодняшний день зарегистрировано более 2000 исследований. Аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы нашли особый успех в лечении заболеваний, связанных с глазами, о чем свидетельствует одобрение voretigene neparvovec-rzyl. Чтобы вывести на рынок новые методы лечения, регулирующие органы обычно запрашивают квалифицированные или подтвержденные исследования биовыделения для оценки высвобождения переносчика в окружающую среду. Тем не менее, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США не выпустило никаких официальных руководств по разработке молекулярных анализов для поддержки таких исследований выделения, что позволяет разработчикам определять для себя лучшие практики. Целью этого протокола является представление валидируемого протокола для обнаружения векторов AAV в слезах человека с помощью капельной цифровой полимеразной цепной реакции (ddPCR) в поддержку клинических исследований биовыделения. В этой рукописи обсуждаются современные отраслевые подходы к валидации молекулярного анализа и демонстрируется, что метод превосходит целевые критерии приемлемости анализа, предложенные в настоящее время в официальных документах. Наконец, обсуждаются шаги, имеющие решающее значение для выполнения любого анализа ddPCR, независимо от применения.