En validerbar droppe digital polymeraskedjereaktionsanalys för detektion av adenoassocierade virala vektorer i biosheddingstudier av tårar

Användningen av virala vektorer för att behandla genetiska sjukdomar har ökat avsevärt de senaste åren, med över 2000 studier registrerade hittills. Adenoassocierade virala (AAV) vektorer har funnit särskild framgång vid behandling av ögonrelaterade sjukdomar, vilket exemplifieras av godkännandet av voretigene neparvovec-rzyl. För att få ut nya terapier på marknaden begär tillsynsmyndigheter vanligtvis kvalificerade eller validerade biosheddingstudier för att utvärdera frisättningen av vektorn i miljön. Inga officiella riktlinjer för utveckling av molekylbaserade analyser för att stödja sådana sheddingstudier har dock släppts av United States Food and Drug Administration, vilket gör att utvecklare kan bestämma bästa praxis för sig själva. Syftet med detta protokoll är att presentera ett validerbart protokoll för detektion av AAV-vektorer i mänskliga tårar genom droppdigital polymeraskedjereaktion (ddPCR) till stöd för kliniska biosheddingstudier. Detta manuskript diskuterar nuvarande industrimetoder för molekylär analysvalidering och visar att metoden överträffar de målanalysacceptanskriterier som för närvarande föreslås i vitböcker. Slutligen diskuteras steg som är kritiska i utförandet av alla ddPCR-analyser, oavsett applikation.