Identifisering av peptider av små ekstracellulære vesikler fra benmargsavledede makrofager

Små ekstracellulære vesikler (sEVs) utskilles vanligvis ved eksocytose av multivesikulære legemer (MVB). Disse nanovesiklene med en diameter på <200 nm er tilstede i forskjellige kroppsvæsker. Disse sEV-ene regulerer ulike biologiske prosesser som gentranskripsjon og -translasjon, celleproliferasjon og overlevelse, immunitet og betennelse gjennom lasten, som proteiner, DNA, RNA og metabolitter. For tiden er det utviklet forskjellige teknikker for isolering av sEV. Blant dem regnes den ultrasentrifugeringsbaserte metoden som gullstandarden og er mye brukt for sEV-isolasjon. Peptidene er naturlig biomakromolekyler med mindre enn 50 aminosyrer i lengde. Disse peptidene deltar i en rekke biologiske prosesser med biologisk aktivitet, som hormoner, nevrotransmittere og cellevekstfaktorer. Peptidomet er ment å systematisk analysere endogene peptider i spesifikke biologiske prøver ved væskekromatografi-tandem massespektrometri (LC-MS / MS). Her introduserte vi en protokoll for å isolere sEV ved differensiell ultrasentrifugering og ekstrahert peptidom for identifisering av LC-MS / MS. Denne metoden identifiserte hundrevis av sEVs-avledede peptider fra beinmargsavledede makrofager.