Live-celle billeddannelse af Drosophila melanogaster tredje stjerne larvehjerner

Drosophila neurale stamceller (neuroblaster, NB'er i det følgende) gennemgår asymmetriske opdelinger, regenererer den selvfornyende neuroblast, samtidig med at der dannes en differentierende ganglionmodercelle (GMC), som vil gennemgå en yderligere opdeling for at give anledning til to neuroner eller glia. Undersøgelser i NB'er har afdækket de molekylære mekanismer, der ligger til grund for cellepolaritet, spindelorientering, neurale stamcellers selvfornyelse og differentiering. Disse asymmetriske celledelinger kan let observeres via levende cellebilleddannelse, hvilket gør larve-NB'er ideelle til at undersøge den rumlige temporale dynamik i asymmetrisk celledeling i levende væv. Når NB'er i eksplantathjerner dissekeres korrekt og afbildes i næringsstofsuppleret medium, deler de sig robust i 12-20 timer. Tidligere beskrevne metoder er teknisk vanskelige og kan være udfordrende for dem, der er nye på området. Her beskrives en protokol til forberedelse, dissektion, montering og billeddannelse af levende tredje-instar larvehjerneeksplanter ved hjælp af fedtkropstilskud. Potentielle problemer diskuteres også, og der gives eksempler på, hvordan denne teknik kan bruges.