Live-Cell Imaging van Drosophila melanogaster Derde Instar Larvale Hersenen

Drosophila neurale stamcellen (neuroblasten, NBs hierna) ondergaan asymmetrische delingen, regenereren de zelfvernieuwende neuroblast, terwijl ze ook een differentiërende ganglionmoedercel (GMC) vormen, die één extra deling zal ondergaan om aanleiding te geven tot twee neuronen of glia. Studies in NBs hebben de moleculaire mechanismen blootgelegd die ten grondslag liggen aan celpolariteit, spindeloriëntatie, neurale stamcelzelfvernieuwing en differentiatie. Deze asymmetrische celdelingen zijn gemakkelijk waarneembaar via live-cell imaging, waardoor larvale NB's bij uitstek geschikt zijn voor het onderzoeken van de spatiotemporale dynamiek van asymmetrische celdeling in levend weefsel. Wanneer ze op de juiste manier worden ontleed en afgebeeld in voedingssupplementen, delen NB's in explanthersenen zich robuust gedurende 12-20 uur. Eerder beschreven methoden zijn technisch moeilijk en kunnen een uitdaging zijn voor degenen die nieuw zijn in het veld. Hier wordt een protocol beschreven voor de voorbereiding, dissectie, montage en beeldvorming van levende derde-instar larvale hersenexplantaten met behulp van vetlichaamsupplementen. Ook worden mogelijke problemen besproken en worden voorbeelden gegeven van hoe deze techniek kan worden gebruikt.