Imagerie de cellules vivantes du cerveau larvaire du troisième stade de Drosophila melanogaster

Les cellules souches neurales de la drosophile (neuroblastes, NBs ci-après) subissent des divisions asymétriques, régénérant le neuroblaste auto-renouvelant, tout en formant une cellule mère ganglionnaire différenciatrice (GMC), qui subira une division supplémentaire pour donner naissance à deux neurones ou glies. Des études sur les NB ont révélé les mécanismes moléculaires sous-jacents à la polarité cellulaire, à l’orientation du fuseau, à l’auto-renouvellement des cellules souches neurales et à la différenciation. Ces divisions cellulaires asymétriques sont facilement observables par imagerie de cellules vivantes, ce qui rend les NB larvaires idéales pour étudier la dynamique spatio-temporelle de la division cellulaire asymétrique dans les tissus vivants. Lorsqu’ils sont correctement disséqués et imagés dans un milieu enrichi en nutriments, les NB dans les cerveaux explantés se divisent vigoureusement pendant 12 à 20 heures. Les méthodes décrites précédemment sont techniquement difficiles et peuvent être difficiles pour ceux qui débutent dans le domaine. Ici, un protocole est décrit pour la préparation, la dissection, le montage et l’imagerie d’explants cérébraux larvaires vivants du troisième stade à l’aide de suppléments de corps gras. Les problèmes potentiels sont également discutés, et des exemples sont fournis sur la façon dont cette technique peut être utilisée.