Live-Cell Imaging av Drosophila melanogaster Tredje Instar Larval Brains

Drosophila nevrale stamceller (neuroblaster, NBs heretter) gjennomgår asymmetriske divisjoner, regenererer den selvfornyende neuroblasten, samtidig som den danner en differensierende ganglionmodercelle (GMC), som vil gjennomgå en ekstra deling for å gi opphav til to nevroner eller glia. Studier i NBs har avdekket de molekylære mekanismene som ligger til grunn for cellepolaritet, spindelorientering, neural stamcelle selvfornyelse og differensiering. Disse asymmetriske celledelingene er lett observerbare via levende celleavbildning, noe som gjør larve NBs ideelt egnet for å undersøke den spatiotemporale dynamikken til asymmetrisk celledeling i levende vev. Når de dissekeres riktig og avbildes i næringstilskuddsmedium, deler NBs i eksplantehjerner seg robust i 12-20 timer. Tidligere beskrevne metoder er teknisk vanskelige og kan være utfordrende for de som er nye på feltet. Her beskrives en protokoll for fremstilling, disseksjon, montering og avbildning av levende tredjestjerners larvehjerneplanter ved bruk av fettkroppstilskudd. Potensielle problemer diskuteres også, og det gis eksempler på hvordan denne teknikken kan brukes.