Levande cellavbildning av Drosophila melanogaster Tredje Instar Larval Brains

Drosophila neurala stamceller (neuroblaster, NBs nedan) genomgår asymmetriska uppdelningar, regenererar den självförnyande neuroblasten, samtidigt som de bildar en differentierande ganglionmodercell (GMC), som kommer att genomgå ytterligare en delning för att ge upphov till två neuroner eller glia. Studier av NB har avslöjat de molekylära mekanismerna bakom cellpolaritet, spindelorientering, självförnyelse av neurala stamceller och differentiering. Dessa asymmetriska celldelningar är lätt observerbara via levande cellavbildning, vilket gör larvala NB idealiska för att undersöka den spatiotemporala dynamiken hos asymmetrisk celldelning i levande vävnad. När de är korrekt dissekerade och avbildade i näringskompletterat medium, delar NB i explanthjärnor robust i 12-20 timmar. Tidigare beskrivna metoder är tekniskt svåra och kan vara utmanande för dem som är nya inom området. Här beskrivs ett protokoll för beredning, dissektion, montering och avbildning av levande tredje instar larvala hjärnexplantat med hjälp av fettkroppstillskott. Potentiella problem diskuteras också, och exempel ges på hur denna teknik kan användas.