제한된 분해와 결합된 농축 비드를 사용한 숙주 세포 단백질 분석

숙주 세포 단백질(HCP)은 소량이라도 치료용 단백질에 악영향을 미칠 수 있는 불순물입니다. 의약품과 관련된 잠재적 위험을 평가하기 위해 저농도 HCP를 식별하는 방법이 개발되었습니다. 민감한 HCP 검출 방법을 개발하기 위한 중요한 접근법은 액체 크로마토그래피-질량분석법(LC-MS)을 활용하여 분석 전에 단클론 항체(mAb)를 제거하는 동시에 HCP를 농축하는 것입니다.

이 프로토콜은 상업적으로 이용 가능한 단백질체 농축 비드를 사용하여 숙주 세포 단백질을 농축하기 위한 자세한 지침을 제공합니다. 이 비드에는 다양한 단백질에 대한 특정 친화력을 가진 다양한 헥사펩타이드 리간드 라이브러리가 포함되어 있습니다. 이 프로토콜은 또한 나노 LC-MS/MS를 사용하여 제한된 분해 및 후속 펩타이드 검출을 통합합니다. 이러한 기술을 사용하면 존재비가 낮은 HCP를 7,000배 이상 농축할 수 있으며, 그 결과 0.002ppm의 놀라운 검출 한계를 달성할 수 있습니다. 중요한 것은 이 프로토콜을 통해 NIST mAb를 사용하여 높은 수준의 신뢰도로 850개의 HCP를 검출할 수 있다는 것입니다. 또한 사용자 친화적으로 설계되었으며 구현을 지원하는 비디오 데모가 포함되어 있습니다. 이러한 단계를 수행함으로써 연구자들은 HCP를 효과적으로 농축하고 검출하여 의약품에 대한 위험 평가의 민감도와 정확성을 향상시킬 수 있습니다.