A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
לתאי סטרומה מזנכימליים שמקורם בשומן (AdMSCs) יש תכונות אימונומודולטוריות חזקות השימושיות לטיפול במחלות הקשורות לדלקת. אנו מדגימים כיצד לבודד ולגדל בתרבית של AdMSCs ותאי גליה מעורבים ראשוניים, לעורר AdMSCs כדי לווסת גנים אנטי דלקתיים וגורמי גדילה, להעריך הגירה של AdMSCs, ותרבית משותפת של AdMSCs עם גליה מעורבת ראשונית נגועה בפריון.
תאי סטרומה מזנכימליים (MSCs) הם רגולטורים רבי עוצמה של דלקת באמצעות ייצור ציטוקינים אנטי דלקתיים, כימוקינים וגורמי גדילה. תאים אלה מראים יכולת לווסת דלקת עצבית בהקשר של מחלות נוירודגנרטיביות כגון מחלת פריון והפרעות אחרות בקיפול שגוי של חלבונים. מחלות פריון יכולות להיות ספורדיות, נרכשות או גנטיות; הם יכולים לנבוע מקיפול שגוי וצבירה של חלבון פריון במוח. מחלות אלה הן תמיד קטלניות, ללא טיפולים זמינים.
אחד הסימנים המוקדמים ביותר למחלה הוא הפעלת אסטרוציטים ותאי מיקרוגליה ודלקת קשורה, המתרחשת לפני צבירת פריונים הניתנים לגילוי ואובדן עצבי; לכן, תכונות אנטי דלקתיות רגולטוריות של MSCs ניתן לקצור לטיפול astrogliosis במחלת פריון. לאחרונה הראינו כי MSCs שמקורם בשומן (AdMSCs) בתרבית משותפת עם תאי BV2 או גליה מעורבת ראשונית מפחיתים דלקת הנגרמת על ידי פריונים באמצעות איתות פרקריני. מאמר זה מתאר טיפול אמין באמצעות AdMSCs מגורה כדי להפחית דלקת הנגרמת על ידי פריונים.
אוכלוסייה הטרוזיגוטית של AdMSCs יכולה בקלות להיות מבודדת מרקמת שומן מורין ולהרחיב בתרבית. גירוי תאים אלה עם ציטוקינים דלקתיים משפר את יכולתם גם לנדוד לכיוון הומוגנט מוחי נגוע פריונים וגם לייצר מודולטורים אנטי דלקתיים בתגובה. יחד, טכניקות אלה יכולות לשמש לחקר הפוטנציאל הטיפולי של MSCs על זיהום פריונים וניתן להתאים אותן לקיפול שגוי של חלבונים אחרים ולמחלות נוירו-דלקתיות.
דלקת גליה ממלאת תפקיד מפתח במגוון מחלות נוירודגנרטיביות, כולל פרקינסון, אלצהיימר ומחלות פריונים. למרות שצבירה חריגה של חלבונים מיוחסת לחלק גדול מפתוגנזה של מחלות וניוון עצבי, תאי גליה גם ממלאים תפקיד בהחמרת 1,2,3 זה. לכן, התמקדות בדלקת הנגרמת על ידי גליה היא גישה טיפולית מבטיחה. במחלת פריונים, חלבון הפריון התאי (PrPC) מתקפל בטעות לחלבון פריון הקשור למחלה (PrPSc), היוצר אוליגומרים וצברים ומשבש את ההומאוסטזיס במוח 4,5,6.
אחד הסימנים המו....
עכברים גודלו והוחזקו ב- Lab Animal Resources של מדינת קולורדו, שהוסמך על ידי האגודה להערכה והסמכה של Lab Animal Care International, בהתאם לפרוטוקול #1138, שאושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת קולורדו.
1. בידוד והדבקת גליה מעורבת קליפת המוח הראשונית עם פריונים
גירוי AdMSCs עם TNFα או אינטרפרון-גמא (IFNγ) במשך 24 שעות גורם לשינויים בביטוי של מולקולות אנטי דלקתיות וגורמי גדילה. טיפול ב- AdMSCs עם TNFα או אינטרפרון-גמא (IFNγ) מגביר את הגן המגורה TNF 6 (TSG-6) mRNA, ואילו TNFα, אך לא IFNγ, גורם לעלייה בשינוי גורם גדילה בטא-1 (TGFβ-1) mRNA. גירוי עם TNFα או IFNγ גורם לעלייה בגורם .......
כאן אנו מדגימים פרוטוקול אמין וזול יחסית להערכת ההשפעות של תאי סטרומה מזנכימליים שמקורם בשומן (AdMSC) בהפחתת דלקת הנגרמת על ידי פריונים במודל תאי גלייה. ניתן בקלות לבודד ולהרחיב את AdMSCs בתרבית לשימוש תוך שבוע אחד בלבד. פרוטוקול זה מייצר באופן עקבי אוכלוסייה הטרולוגית של תאים המבטאים סמנים הת?.......
המחברים מודים ל-Lab Animal Resources על גידול בעלי החיים. מקורות המימון שלנו לכתב יד זה כוללים את קרן בוטצ'ר, קרן מרפי טרנר, מכללת CSU לרפואה וטרינרית ומועצת המחקר של המכללה למדעים ביו-רפואיים. איור 2A, איור 2C ואיור 3A נוצרו עם BioRender.com.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.25% Trypsin | Cytiva | SH30042.01 | |
5 mL serological pipets | Celltreat | 229005B | |
6-well tissue culture plates | Celltreat | 229106 | |
10 cm cell culture dishes | Peak Serum | PS-4002 | |
10 ml serological pipets | Celltreat | 229210 | |
15 mL conical tubes | Celltreat | 667015B | |
50 mL conical tubes | Celltreat | 667050B | |
BV2 microglia cell line | AcceGen Biotech | ABC-TC212S | |
Cell lifter | Biologix Research Company | 70-2180 | |
Crystal violet | Electron Microscopy Sciences | 12785 | |
Dispase | Thermo Scientific | 17105041 | |
DMEM/F12 | Caisson Labs | DFL14-500ML | |
DNase-I | Sigma Aldrich | 11284932001 | |
Essential amino acids | Thermo Scientific | 11130051 | |
Ethanol (100%) | EMD Millipore | EX0276-1 | |
Fetal bovine serum (heat inactivated) | Peak Serum | PS-FB4 | Can be purchased as heat inactivated or inactivated in the laboratory |
Formaldehyde | EMD Millipore | 1.04003.1000 | |
Glass 10 mL serological pipet | Corning | 7077-10N | |
Hank’s Balances Salt Solution | Sigma Aldrich | H8264-500ML | |
Hemocytometer/Neubauer Chamber | Daigger | HU-3100 | |
High Glucose DMEM | Cytiva | SH30022.01 | |
low glucose DMEM containing L-glutamine | Cytiva | SH30021.01 | |
MEM/EBSS | Cytiva | SH30024.FS | |
non-essential amino acids | Sigma-Aldrich | M7145-100M | |
Paraformaldehyde (16%) | MP Biomedicals | 219998320 | |
Penicillin/streptomycin/neomycin | Sigma-Aldrich | P4083-100ML | |
Phosphate buffered saline | Cytiva | SH30256.01 | |
Recombinant Mouse IFN-gamma Protein | R&D Systems | 485-MI | |
Recombinant Mouse TNF-alpha (aa 80-235) Protein, CF | R&D Systems | 410-MT | |
RNeasy mini kit | Qiagen | 74104 | |
Sigmacote | Sigma Aldrich | SL2-100ML | Coat inside of glass pipets by aspirating up and down twice in Sigmacote and allowing to dry thoroughly. Wrap in aluminum foil and autoclave pipets 24 h later. |
Stemxyme | Worthington Biochemical Corporation | LS004106 | Collagenase/Dispase mixture |
Sterile, individually wrapped cotton swab | Puritan Medical | 25-8061WC | |
Thincert Tissue Culture Inserts, 24 well, Pore Size=8 µm | Greiner Bio-One | 662638 | |
Thincert Tissue Culture Inserts, 6 well, Pore Size=0.4 µm | Greiner Bio-One | 657641 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved