Modificeret In vivo Matrix Gel Plug Assay til angiogenese undersøgelser

Flere modeller er blevet udviklet til at undersøge angiogenese in vivo. Imidlertid er de fleste af disse modeller komplekse og dyre, kræver specialudstyr eller er svære at udføre til efterfølgende kvantitativ analyse. Her præsenterer vi et modificeret matrixgelpropassay for at evaluere angiogenese in vivo. I denne protokol blev vaskulære celler blandet med matrixgel i nærvær eller fravær af proangiogene eller antiangiogene reagenser og derefter subkutant injiceret i ryggen af modtagermus. Efter 7 dage injiceres fosfatbuffersaltvand indeholdende dextran-FITC via halevenen og cirkuleres i beholdere i 30 minutter. Matrixgelpropper opsamles og indlejres med vævsindlejringsgel, derefter skæres 12 μm sektioner til fluorescensdetektion uden farvning. I dette assay kan dextran-FITC med høj molekylvægt (~ 150.000 Da) bruges til at indikere funktionelle beholdere til påvisning af deres længde, mens dextran-FITC med lav molekylvægt (~ 4.400 Da) kan bruges til at indikere permeabiliteten af neo-kar. Afslutningsvis kan denne protokol tilvejebringe en pålidelig og bekvem metode til kvantitativ undersøgelse af angiogenese in vivo.