التعبير الجيني المحوري في الخلايا المستزرعة باستخدام النواقل الفيروسية المرتبطة بالغدي المؤتلف غير المنقى

يمكن للنواقل الفيروسية المرتبطة بالغدي المؤتلف (rAAV) أن تحقق تعبيرا قويا ودائما عن جين التحوير دون التكامل في مجموعة واسعة من أنواع الأنسجة ، مما يجعلها خيارا شائعا لتوصيل الجينات في النماذج الحيوانية وفي البيئات السريرية. بالإضافة إلى التطبيقات العلاجية ، تعد rAAVs أداة مختبرية مفيدة لتوصيل جينات التحوير المصممة خصيصا لتلبية الاحتياجات التجريبية للباحث والأهداف العلمية في الخلايا المزروعة. تتضمن بعض الأمثلة جينات المراسل الخارجية ، وأشرطة الإفراط في التعبير ، وتداخل الحمض النووي الريبي ، والأدوات القائمة على كريسبر ، بما في ذلك تلك الخاصة بشاشات الجينوم الواسعة. تعتبر عمليات نقل rAAV أقل ضررا للخلايا من التثقيب الكهربائي أو النقل الكيميائي ولا تتطلب أي معدات خاصة أو كواشف باهظة الثمن لإنتاجها. يمكن إضافة المحللات الخام أو الوسائط المكيفة التي تحتوي على rAAVs مباشرة إلى الخلايا المستزرعة دون مزيد من التنقية لتحويل العديد من أنواع الخلايا - وهي ميزة لا تحظى بالتقدير الكافي ل rAAVs. هنا ، نقدم بروتوكولات لاستنساخ كاسيت الجينات المحورة الأساسية ونوضح كيفية إنتاج وتطبيق مستحضرات rAAV الخام على الخلايا المستزرعة. كدليل على المبدأ ، نثبت نقل ثلاثة أنواع من الخلايا لم يتم الإبلاغ عنها بعد في تطبيقات rAAV: خلايا المشيمة ، الأرومات العضلية ، والكائنات العضوية المعوية الدقيقة. نناقش الاستخدامات المناسبة لمستحضرات rAAV الخام ، وقيود rAAVs لتوصيل الجينات ، واعتبارات اختيار القفيصة. يحدد هذا البروتوكول طريقة بسيطة ومنخفضة التكلفة وفعالة للباحثين لتحقيق توصيل الحمض النووي المنتج في زراعة الخلايا باستخدام rAAV دون الحاجة إلى خطوات معايرة وتنقية شاقة.