Pinza iperglicemica e pinza ipoglicemica nei topi coscienti

Summary

Un morsetto iperglicemico viene utilizzato per misurare il rilascio di insulina con una concentrazione di glucosio nel sangue più elevata. Un morsetto ipoglicemico serve a misurare la produzione di glucosio indotta da risposte controregolatorie. Entrambi i metodi utilizzano la stessa procedura chirurgica. Qui, presentiamo una tecnica di clamp per valutare il metabolismo sistemico del glucosio.

Abstract

Il diabete mellito (DM) è causato da un insufficiente rilascio di insulina dalle cellule β pancreatiche (DM di tipo 1) e dalla sensibilità all'insulina nei muscoli, nel fegato e nei tessuti adiposi (DM di tipo 2). L'iniezione di insulina tratta i pazienti affetti da DM, ma porta all'ipoglicemia come effetto collaterale. Il cortisolo e le catecolamine vengono rilasciati per attivare la produzione di glucosio dal fegato per recuperare l'ipoglicemia, chiamate risposte controregolatorie (CRR). Nella ricerca sul DM che utilizza modelli di roditori, i test di tolleranza al glucosio e l'iniezione di 2-deossi-glucosio vengono utilizzati per misurare rispettivamente il rilascio di insulina e il CRR. Tuttavia, le concentrazioni di glucosio nel sangue cambiano in modo persistente durante gli esperimenti, causando difficoltà nella valutazione del rilascio netto di insulina e del CRR. Questo articolo descrive un metodo in cui la glicemia viene mantenuta a 250 mg/dL o 50 mg/dL in topi coscienti per confrontare il rilascio di insulina e ormoni CRR, rispettivamente.

Un tubo di polietilene viene impiantato nell'arteria carotide e nella vena giugulare dei topi e i topi possono riprendersi dall'intervento chirurgico. Il tubo della vena giugulare è collegato a una siringa Hamilton con una pompa a siringa per consentire l'infusione di insulina o glucosio a una velocità costante e variabile. Il tubo dell'arteria carotide serve per la raccolta del sangue. Per il morsetto iperglicemico, il glucosio al 30% viene infuso nella vena e i livelli di glucosio nel sangue vengono misurati dal sangue arterioso ogni 5 minuti o 10 minuti. La velocità di infusione del glucosio al 30% viene aumentata fino a quando il livello di glucosio nel sangue diventa di 250 mg/dL. Il sangue viene raccolto per misurare le concentrazioni di insulina. Per il morsetto ipoglicemico, 10 mU/kg/min di insulina vengono infusi insieme al 30% di glucosio, la cui velocità di infusione è variabile per mantenere un livello di glucosio nel sangue di 50 mg/dL. Il sangue viene raccolto per misurare gli ormoni controregolatori quando sia l'infusione di glucosio che la glicemia raggiungono uno stato stazionario. Sia le pinze iperglicemiche che quelle ipoglicemiche hanno la stessa procedura chirurgica e le stesse configurazioni sperimentali. Pertanto, questo metodo è utile per i ricercatori del metabolismo sistemico del glucosio.

Introduction

Il glucosio è un'importante fonte di energia per le cellule e la mancanza di glucosio può portare a una varietà di sintomi e complicazioni. In caso di ipoglicemia (ipoglicemia, generalmente inferiore a 70 mg/dL nel livello di glucosio nel sangue a digiuno, ma non deve essere determinato da un singolo valore¹), i sintomi più comuni includono debolezza, confusione, sudorazione e mal di testa. Può anche interrompere la funzione cerebrale e aumentare il rischio di eventi cardiovascolari e mortalità². Al contrario, l'iperglicemia è una condizione medica in cui la concentrazione plasmatica di glucosio supera i livelli normali ....

Protocol

Tutte le procedure sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università di Kumamoto.

NOTA: Per alleviare il dolore, l'ibuprofene è stato somministrato in acqua potabile (0,11 mg/ml) per 48 ore e la buprenorfina (0,05-0,1 mg/kg i.p.) è stata somministrata 30 minuti prima dell'intervento chirurgico. Le condizioni sterili includono guanti, maschere e strumenti sterilizzati in autoclave con ossido di etilene tra gli animali. L'intervento è stato eseguit.......

Discussion

Il metodo qui descritto è semplice e può essere eseguito con puntali per pipette, siringhe e altri oggetti che si trovano nei normali laboratori. Sebbene i ricercatori possano aver bisogno di acquistare tubi e pompe aggiuntivi, non sono necessarie attrezzature costose. Pertanto, questo protocollo di cateterismo e clamp è più facile da avviare rispetto ai precedenti rapporti 12,13,14.

La tecnica de.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Adhesive glue	Henkel AG & Co. KGaA	LOCTITE 454
ELISA kit (C-peptide)	Morinaga Institute of Bilogical Science Inc	M1304	Mouse C-peptide ELISA Kit
ELISA kit (insulin)	FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation	633-03411	LBIS Mouse Insulin ELISA Kit (U-type)
Handy glucose meter	Nipro Co.	11-777	Free Style Freedom Lite
Insulin (100U/ml)	Eli Lilly & Co.	428021014	Humulin R (100U/ml)
Mouse	Japan SLC Inc.	C57BL/6NCrSlc	C57BL
Suture	Natsume seisakusho	C-23S-560 No.2	Sterilized
Syringe Pump	Pump Systems Inc.	NE-1000
Synthetic suture	VÖMEL	HR-17
Tubing1	AS ONE Corporation	9-869-01	LABORAN(R) Silicone Tube
Tubing2	Fisher Scientific	427400	BD Intramedic PE Tubing
Tubing3	IGARASHI IKA KOGYO CO., LTD.	size5	Polyethylene tubing size5