פרוטוקול זה מתאר שיטה לגרימת פגיעה אלקלית מדויקת וניתנת לשחזור בקרנית ובגפיים במודל עכבר. לפרוטוקול יש יתרון מכיוון שהוא מאפשר פגיעה מפוזרת באופן שווה בקרנית ובלימבוס של עכבר מעוקל מאוד.
הקרנית קריטית לראייה, וריפוי הקרנית לאחר טראומה הוא חיוני לשמירה על שקיפותה ותפקודה. באמצעות חקר מודלים של פגיעות בקרנית, החוקרים שואפים לשפר את הבנתם כיצד הקרנית מחלימה ולפתח אסטרטגיות למניעה וניהול אטימות הקרנית. פגיעה כימית היא אחד ממודלי הפציעה הפופולריים ביותר שנחקרו בהרחבה על עכברים. רוב החוקרים הקודמים השתמשו בנייר שטוח ספוג בנתרן הידרוקסידי כדי לגרום לפגיעה בקרנית. עם זאת, גרימת פגיעה בקרנית ובגפיים באמצעות נייר סינון שטוח אינה אמינה, מכיוון שקרנית העכבר מעוקלת מאוד. כאן, אנו מציגים מכשיר חדש, ניקוב ביופסיה שונה, המאפשר לחוקרים ליצור פגיעה אלקלית מוגבלת היטב, מקומית ומפוזרת באופן שווה בקרנית ובלימבוס. שיטת ניקוב-טרפין זו מאפשרת לחוקרים לגרום לכוויה כימית מדויקת וניתנת לשחזור לכל הקרנית והלימבוס של מורין תוך השארת מבנים אחרים, כגון העפעפיים, ללא השפעה של הכימיקל. יתר על כן, מחקר זה מציג טכניקת enucleation המשמרת את הקרונקל המדיאלי כציון דרך לזיהוי צד האף של כדור הארץ. הבולבר והלחמית המישושית, ובלוטת הדמעות נשמרים גם הם שלמים באמצעות טכניקה זו. בדיקות עיניים בוצעו באמצעות ביומיקרוסקופ של מנורת סדק וצביעת פלואורסצאין בימים 0, 1, 2, 6, 8 ו-14 לאחר הפציעה. ממצאים קליניים, היסטולוגיים ואימונוהיסטוכימיים אישרו מחסור בתאי גזע לימבליים וכשל בהתחדשות פני השטח של העין בכל עכברי הניסוי. מודל הפגיעה בקרנית אלקלית המוצג אידיאלי לחקר מחסור בתאי גזע לימבליים, דלקת בקרנית ופיברוזיס. שיטה זו מתאימה גם לחקירת יעילות פרה-קלינית וקלינית של תרופות אופתלמולוגיות מקומיות על פני הקרנית.
הקרנית קריטית לראייה ובעלת מאפיינים ייחודיים, כולל שקיפות, שהיא תנאי מוקדם לראייה ברורה. בנוסף לתפקיד המגן העיקרי, הקרנית מהווה 2/3 מכוח השבירה של העין1. בשל תפקידו המשמעותי בראייה, פגיעות ואטימות בקרנית גורמות לירידה משמעותית בראייה ואחראיות לגורם השני בגובהו לעיוורון הניתן למניעה בעולם 2,3. בפגיעות בקרנית עם תפקוד גפי חמור, תפקוד המחסום של הלימבוס פוחת, וכתוצאה מכך נדידת תאי הלחמית לכיוון פני הקרנית ולחמית הקרנית 4,5, מה שפוגע בראייה באופן דרמטי. לפיכך, נדרשות אסטרטגיות מניעה וטיפול יעילות כדי להתמודד עם הנטל העולמי של עיוורון הקרנית והנכות הנלווית אליו.
ההבנה הנוכחית של תהליך ריפוי פצעי הקרנית האנושית מבוססת על מחקרים קודמים שבדקו את תגובות הקרנית לפציעות שונות. מספר טכניקות ומודלים של בעלי חיים שימשו כדי לגרום לפציעות כימיות או מכניות שונות בקרנית 6,7,8,9 ולחקור היבטים שונים של תהליך ריפוי פצעי הקרנית.
מודל הכוויה האלקלית הוא מודל פציעה מבוסס היטב המבוצע על ידי מריחת נתרן הידרוקסידי (NaOH) על פני הקרנית ישירות או באמצעות נייר סינון שטוח10. פגיעה אלקלית גורמת לשחרור מתווכים פרו-דלקתיים וחדירה של תאים פולימורפו-גרעיניים לא רק בקרנית ובחדר הקדמי של העין אלא גם ברשתית. זה גורם לאפופטוזיס לא מכוון של תאי גנגליון ברשתית והפעלת תאי CD45+ 11. לכן, קריטי למקם את מקום הפציעה בדיוק כדי למנוע פגיעה מוגזמת ולא מכוונת באמצעות מודל פציעה אלקלי.
אורך הציר של גלגל העין המורין הוא כ 3 מ"מ12. בשל המרחק הקצר הזה בין הקרנית לרשתית, קיימת עקמומיות קרנית תלולה המספקת כוח שבירה גבוה כדי למקד את האור ברשתית (איור 1A). כפי שדיווחנו בעברעל 13, קשה לגרום לפגיעה כימית במשטח המעוגל מאוד הזה באמצעות נייר סינון שטוח, במיוחד בלימבוס (איור 1B). גרימת פגיעה בלימבוס דורשת הטיית נייר הסינון, שיש לו פוטנציאל לגרום לפגיעה בלתי מכוונת בפורניקס ובלחמית הסמוכה14. גישה אחרת כוללת יישום ישיר של החומר הכימי כטיפות על פני הקרנית. עם זאת, שיטה זו חסרה שליטה על זמן החשיפה, וקיים סיכון פוטנציאלי לגרימת פגיעה בלחמית, בפורניקס ובעפעפיים עקב פיזור הנוזל לאזורים אלה.
כדי להתגבר על מגבלות אלה, מחקר זה מציג שיטת אגרוף-טרפין חדשנית לגרימת פציעה. לטכניקה זו מספר יתרונות, כולל (i) גרימת פגיעה כימית יעילה לכל משטח הקרנית והלימבוס במודל עכבר, (ii) גרימת פגיעה מקומית ומוגבלת היטב לקרנית, (iii) היכולת למרוח כל נוזל מעניין למשך זמן קבוע מראש, ו-(iv) היכולת לגרום לגדלים שונים של פציעות בקרנית על ידי בחירת אגרופי ביופסיה מתאימים. שיטה זו אפשרית גם עבור מודלים של פציעות חולדות וארנבות, המציגים גם משטח קרנית מעוקל והם מודלים נפוצים של בעלי חיים המשמשים לחקר ריפוי פצעים על פני השטח של העין.
כל ההליכים בוצעו בהתאם לטיפול בבעלי חיים במעבדה של סטנפורד APLAC מספר 33420, שימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות, והצהרת ARVO לשימוש בבעלי חיים במחקר עיניים וראייה. 10 עכברים זכרים ונקבות C57BL/6 בגילאי 8-12 שבועות סופקו בנדיבות על ידי מעבדת אירווינג ל. וייסמן. בעלי החיים התאקלמו למחזור אור-חושך של 12 שעות וסופקו להם מים ומזון עד לליביטום. הפגיעה נגרמה לעין אחת של החיה.
1. הכנה לניסוי
2. הכנת בעלי חיים
3. אינדוקציה של פגיעה אלקלית
4. הערכה קלינית
5. חינוך
6. צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E) וחומצה תקופתית שיף (PAS)
7. הדמיה וניתוח אימונופלואורסנציה
יעילות השיטה בגרימת מחסור בתאי גזע לימבליים (LSCD) הוערכה על ידי הערכת הסימנים הקליניים וההיסטולוגיים של LSCD. ההערכה הקלינית נעשתה באמצעות מיקרוסקופ מנורות חריץ והדמיית טומוגרפיית קוהרנטיות אופטית קדמית (AS-OCT) (איור 3 ואיור 4).
אפיתל מחדש התרחש באופן צנטריפטלי והיה מהיר יותר בחלק הרקתי של הקרנית בהשוואה לחלק האף שלה. עיניים פגועות פיתחו אובך קרנית 2+-3+ מיד לאחר פגיעה כימית (איור 3). תאי אפיתל נדדו מהלחמית אל פני הקרנית בעקבות פגיעה בגפיים. הפגם הגדול באפיתל הקרנית עבר אפיתל מחדש לחלוטין בימים 12-14, מה שלקח זמן רב יותר בהשוואה לפגיעה באפיתל הקרנית בגודל דומה ובקרום מרתף שלם וסטרומה שבדרך כלל נרפא תוך 5 ימים לאחר הפציעה 8,9. כתוצאה מ-LSCD, 50% מהעיניים הפגועות פיתחו מומי אפיתל מתמשכים בסוף השבוע השני (איור 3). בצקת בקרנית הייתה בולטת יותר בימים הראשונים (איור 3, איור 4), ואילו פיברוזיס בקרנית היה משמעותי בשבוע השני שהביא לאטימות קרנית של 4+ ב-100% מהעיניים הפגועות.
סימנים מוקדמים של ניאו-וסקולריזציה (NV) נצפו קלינית והיסטולוגית, 24 שעות לאחר השראת פגיעה כימית, כפי שמודגם באיור 5, בהתאם לציר הזמן של NV שזוהה על ידי Kvanta et al. מחקר שהראה סימן של NV לימבלי 24 שעות לאחר פציעה22. במהלך תהליך ההחלמה, כלי דם חדשים הבשילו וביום ה -14 לאחר הפציעה, NV חצה את הלימבוס והגיע למרכז הקרנית. הלימבוס, המגדיר את הגבול בין הלחמית לקרנית, נהרס.
עדות היסטולוגית למחסור בתאי גזע לימבליים ולחמית נצפתה על ידי הופעת תאי גביע PAS+ וכלי דם סטרומה 23,24,25,26. תאי גביע נצפו במודל הפציעה הנוכחי וסומנו על-ידי החץ באיור 6.
אפיתל הלחמית והקרנית מבטא בעיקר קרטינים ייחודיים, K13 ו-K12, בהתאמה27. לאחר הפגיעה הגפיים, תאי אפיתל חדשים שמקורם בלחמית כיסו את הקרנית הצפופה, ו-K12 לא בא לידי ביטוי על פני הקרנית של בעלי חיים פצועים במשך שבועיים לאחר הפציעה. ממצא זה, העולה בקנה אחד עם מחקרים אחרים28, הצביע על LSCD מלא והיעדר תאי אפיתל בקרנית על פני הקרנית. עם זאת, במחקר שנערך על ידי פארק ואחרים 29, הם זיהו ביטוי K12 20 ו -32 שבועות לאחר הפציעה, מה שמרמז על התמיינות טרנס אפשרית של תאי האפיתל.
כתוצאה מכך, ראינו כי פגיעה כימית הרסה את הלימבוס ואת תאי הגזע הלימבליים, מה שהביא לנדידה של תאי אפיתל הלחמית למרכז הקרנית כדי לכסות את פני הקרנית הצפופים. זה מאומת עוד יותר על-ידי סמן תאי האפיתל של הלחמית, K13, שהתבטא בכל משטחי הלחמית והקרנית כפי שמוצג באיור 7.
איור 1: עין ימין רגילה של עכבר והאגרוף-טרפין לגרימת פגיעה בקרנית ובגפיים. (A) מבט רוחבי המראה עין עכבר עם קרנית מעוקלת מאוד (ראשי חץ מציינים את הלימבוס). (B) התמונה מראה שאפילו נייר סינון גדול אינו מספיק כדי לכסות כראוי את אזור הגפיים. קוטר הלימבוס עד הלימבוס של עין העכבר הוא כמעט 4 מ"מ וביופסיה של ניקוב בקוטר חיצוני של 4.5 מ"מ וקוטר פנימי של 3.5 מ"מ (לוחות D ו-H), מכסה כראוי את פני הקרנית והגפיים כפי שמוצג בלוחות (C) ו-(E). (F) האגרוף-טרפין מוחזק כראוי על פני כדור הארץ סביב אזור הלימבל. (G) כדי להבטיח שאין דליפה דרך קצה הפאנץ'-טרפין, לאחר מיקום מתאים של הפאנץ'-טרפין בציר מקביל לגלובוס, החור מתמלא בכחול מתילן. לא מזוהה דליפה של מתילן כחול. סרגל קנה מידה = 1 מ"מ. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: עיניים מלומדות. (A) העיניים עברו אינקולציה תוך שמירה על הלחמית הבולברית והמישושית, בלוטת הדמעות (ראש החץ) ועצב הראייה (חץ). העיניים הרגילות (B) והפצועות (C) היו רוויות ב-30% סוכרוז כדי להגן מפני היווצרות קריוגבישים. ניתן לזהות את חלק האף של כדור הארץ דרך האף (מסומן N). סרגל קנה מידה = 1 מ"מ. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3: ריפוי פצעים בעין שמאל. תהליך ריפוי הפצע של עין העכבר השמאלית במשך שבועיים לאחר פגיעה אלקלית בקרנית ובגפיים במודל עכבר מוצג כאן (A-F). בדיקת מנורת החריץ של העין. בצקת בקרנית בולטת יותר בימים 0 ו-2 (A,B), ואילו פיברוזיס בולטת יותר בשבוע השני שלאחר הפציעה (E-F). A.f-F.f מראים את תהליך האפיתל מחדש של אותה עין. פגם אפיתל כולל בקרנית ובגפיים מיד לאחר השראת הפציעה נצפה ב- A.f. פגם אפיתל נרפא על ידי נדידת תאי אפיתל הלחמית בתבנית צנטריפטלית על ידי 12-14 ימים (A.f-F.f). עם זאת, 50% מהעיניים הפגועות פיתחו פגם אפיתל מתמשך בסוף השבוע השני, כפי שניתן לראות בחץ בתמונות F ו-F.F. סרגל קנה מידה = 1 מ"מ (לוח C). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 4: OCT של המקטע הקדמי של עין העכבר. (A) AS-OCT מדגים עקמומיות קרנית תקינה והחדר הקדמי. מבנה הקשתית מוגדר היטב וניתן לזיהוי. לא ניתן להבחין בהידבקות אירידוקרנית באמצע הפריפריה של הקשתית. (B) מיד לאחר הפציעה עובי הקרנית עולה עקב היווצרות בצקת ומתפתחת הידבקות אירידוקרנית בפריפריה האמצעית של הקשתית. (C) שבועיים לאחר הפציעה עקמומיות הקרנית השתנתה וניתן לראות הידבקות אירידוקרנית מוחלטת עם הרס החדר הקדמי. סרגל קנה מידה = 1 מ"מ. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 5: ניאו-וסקולריזציה של הקרנית. סימנים קליניים והיסטולוגיים של ניאו-וסקולריזציה של הקרנית ניתן לראות במהלך תהליך ריפוי הפצע לאחר פגיעה בנתרן הידרוקסידי (NaOH). (A) הסימנים הראשוניים של ניאו-וסקולריזציה ניתנים לזיהוי ביום הראשון לאחר הפציעה, המאופיינים בשינוי צבע אדמדם של הקרנית (מסומן בחץ לבן). שינוי צבע זה נובע מצבירה של תאי דם אדומים בסטרומה, כפי שמודגם בתמונה היסטולוגית תואמת (D) (מסומנת על ידי ראשי חץ צהובים). (B) במהלך השבוע הראשון של ההתחדשות, כלי דם חדשים גדלים בהדרגה ומתפשטים ברחבי הקרנית. (C) בתום שבועיים, אזור הלימבל נהרס, וכלי הדם החדשים ממשיכים להתפתח. (E) החלק ההיסטולוגי של הקרנית ממחיש עוד יותר את נוכחותה של ניאו-וסקולריזציה של סטרומה עמוקה (מוצגת על-ידי ראשי חץ). מנורת סדק סרגל קנה מידה של תמונה = 1 מ"מ, סרגל קנה המידה של תמונת היסטולוגיה = 50 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 6: צביעה תקופתית של קרנית חומצה-שיף ואימונוהיסטוכימיה (IHC). צביעה תקופתית של חומצה שיף ואימונוהיסטוכימיה של הקרנית הרגילה והפצועה נעשתה שבועיים לאחר הפציעה. אפיתל קרנית עכבר רגיל המורכב מ 4-5 שכבות של תאים (A). פגיעה אלקלית בקרנית ובלימבוס הובילה ללחמית של הקרנית עם הופעת תאי גביע על פני הקרנית כפי שמוצג על ידי חצים שחורים ב-(D). תאי אפיתל תקינים בקרנית מבטאים K12 (B), שאינו מבוטא על ידי תאי הלחמית המכסים את הקרנית הפגועה (E). K13, סמן אופייני של תאי אפיתל לחמית, אינו מבוטא על תאי אפיתל הקרנית הרגילים (C). עם זאת, הוא קיים על פני הקרנית הפגועים נתרן הידרוקסידי (NaOH) המהווה סימן ללחמית הקרנית (F). סרגל קנה מידה של תמונה היסטולוגיה = 50 מיקרומטר, סרגל קנה מידה של תמונה מוכתמת IHC = 20 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 7: המטוקסילין ואאוזין וצביעה אימונוהיסטוכימית. נעשה המטוקסילין ואאוזין (H&E) וצביעה אימונוהיסטוכימית של רקמת הלימבוס הרגילה והפגועה. (A) הלימבוס התקין מסמן את אזור המעבר בין קצה לובן העין לתחילת הקרנית. אזור זה מכוסה בדרך כלל על ידי שכבה אחת או שתיים של תאי אפיתל הלחמית (מסומן על ידי החיצים). בעין בריאה, הביטוי של סמן אפיתל קרנית ספציפי הנקרא K12 מתחיל בלימבוס ומשתרע על פני השטח של הקרנית (מוצג בתמונה B). מצד שני, הביטוי של סמן לחמית המכונה K13 מוגבל ללימבוס ואינו משתרע מעבר לו (מסומן על ידי החץ הלבן בתמונה C). בעיניים שנפגעו מנתרן הידרוקסידי (NaOH), גבולות הלימבוס משתבשים. זה מוביל לנדידה של תאי הלחמית לכיוון הקרנית הפגועה. (D) התמונות של הלימבוס הפגוע NaOH מדגימות נוכחות של ניאו-וסקולריזציה הן מתחת לשכבת האפיתל והן בתוך רקמת הסטרומה. לאחר הפציעה, פני הקרנית הפגועים חסרים נוכחות של K12 (E), בעוד K13 מבוטא בשפע על פני הקרנית (F). סרגל קנה מידה של תמונה היסטולוגיה = 50 מיקרומטר, סרגל קנה מידה של תמונה מוכתמת IHC = 100 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
קובץ משלים 1: פרוטוקול צביעה. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
סרטון 1: פגיעת קרנית וגפיים NaOH במודל עכבר עם אגרוף-טרפין. הסרטון מדגים את ההליך של גרימת פגיעה בקרנית ובגפיים NaOH במודל עכבר עם אגרוף-טרפין. חשוב להחזיק את האגרוף-טרפין בציר מקביל עם כדור הארץ ולהפעיל לחץ מינימלי על הלימבוס. טכניקה נכונה זו חיונית למניעת דליפה ולהשגת תוצאות אופטימליות. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.
סרטון 2: המחשה של טכניקת האינקולציה תוך שמירה על לחמית הבולבר. כדי להבדיל בין צד האף של כדור הארץ לבין הצד הטמפורלי, האף נשמר יחד עם הגלובוס. הלחמית כולה מחולקת החל מהצומת שלה ועד לצלחת הטרסלית. עם לחץ מינימלי, התוכן המסלול בולט כלפי חוץ. על ידי הנחיית המלקחיים לכיוון החלק האחורי של כדור הארץ, עצב הראייה נתפס, והרקמה מופקת. הרקמה כוללת את כדור הארץ, שומן אורביטלי ובלוטת הדמעות המסלולית. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.
מחקר זה מציע מכשיר חדשני, הפונץ'-טרפין, אשר ניתן להשתמש בו כדי לגרום בהצלחה לפגיעה יעילה וניתנת לשחזור בקרנית ובגפיים במודל עכבר. מודל חסר בתאי גזע לימבליים זה אידיאלי לחקר הדינמיקה של ריפוי פצעי הקרנית והלחמית לאחר פציעה.
עדויות מצביעות על כך שגם הגומחה הלימבלית וגם החלק המרכזי של הקרנית המורין מכילים תאי גזע30. לכן, נדרשת פגיעה יעילה בקרנית ובגפיים כדי לייצר מודל חסר בתאי גזע, ומודל הפגיעה המוצג כאן מאפשר חשיפה של הלימבוס המעוגל של הקרנית לחומר כימי לתקופה מסוימת. כדי לקבוע את הריכוז ומשך הזמן הטובים ביותר של פגיעת NaOH, נגרמו פציעות עם ריכוזים ומשכי זמן שונים של NaOH. ריכוזי NaOH גבוהים יותר או משכי חשיפה ארוכים יותר גרמו לנזק מוגבר לרקמות ולפיברוזיס. לכן, החוקרים יכולים להתאים פרמטרים אלה בהתבסס על המטרות הספציפיות של המחקר שלהם ואת חומרת הפציעה הרצויה.
כדי לשחזר בהצלחה את מודל הפגיעה בקרנית ובגפיים, יש לקחת בחשבון מספר שיקולים מרכזיים. ראשית, חובה למדוד את קוטר הלימבל עד הלימבל של עין היעד כדי לקבוע את הגודל המתאים של האגרוף. מומלץ לבחור ניקוב ביופסיה בקוטר חיצוני הגדול ב-0.5-1 מ"מ מקוטר זה.
מתח הפנים של הנוזל שבו משתמשים הוא גורם חשוב במניעת דליפה בממשק שבין משטח העין לקצה טרפין הניקוב, כפי שמוצג באיור 1G. לכן, אין צורך להפעיל לחץ על קצה ביופסיית האגרוף.
כדי להימנע מגרימת נזק מכני לרקמה, חשוב להחזיק את האגרוף טרפין בציר מקביל עם העין ולהימנע מהפעלת לחץ על הלימבוס. התאמה לא נכונה של ציר הניקוב עלולה להגביר את הסיכון לדליפה ולגרום לאתר פציעה ותוצאות לא מדויקות.
כמה מגבלות אפשריות של טכניקה זו כוללות את הצורך לבחור את גודל האגרוף המתאים, רכישת מיומנות בהחזקת האגרוף טרפין והסיכון הפוטנציאלי לגרימת פציעה מכנית. עם זאת, ניתן להתגבר על מגבלות אלה באמצעות תרגול ועל ידי ביצוע ההוראות המפורטות בפרוטוקול זה. הזן וטווח הגילאים של העכברים הם גורמים נוספים המשפיעים על תהליך האפיתל מחדש ויש לקחת אותם בחשבון במחקר.
יתר על כן, הפרוטוקול המוצע הוא יתרון שכן הוא מפרט שיטת enucleation המשמרת את הלחמית bulbar ו palpebral ומאפשר קביעת החלק האף של העולם ללא יישום של תפרים כירורגיים כסמן. מחקרים קודמים הצביעו על כך שאזור האף של העין הוא בעל העצבוב העצבי הנמוך ביותר בהשוואה לאזורים אחרים בקרנית, מה שהופך אותו לפגיע יותר לניאו-וסקולריזציה וליעילות רגנרטיבית מופחתת31,32.
לסיכום, הסימנים הקליניים של LSCD, כגון אטימות הקרנית (CO), פגמים אפיתליאליים מתמשכים, וניאו-וסקולריזציה של הקרנית (NV), יחד עם השינויים ההיסטולוגיים שנצפו, כולל מטאפלזיה של תאי גביע, ביטוי של K13 על פני הקרנית, והיעדר K12 על פני הקרנית, מאשרים את נוכחותו של LSCD במודל זה. ממצאים אלה מספקים ראיות לכך שטכניקה חדשנית זו יעילה בגרימת LSCD. מודל פגיעה כימית זה יכול לשמש במחקרים פרה-קליניים כדי לחקור תרופות חדשות וטיפולים תרופתיים בתחום הפגיעה וההתחדשות של הקרנית.
אנו מכירים בכך ש-NEI P30-EY026877 תומך במחקר זה. אנו מודים מאוד לשרלין וואנג ולמעבדת ד"ר אירב וייסמן במכון לביולוגיה של תאי גזע ורפואה רגנרטיבית באוניברסיטת סטנפורד על כל עזרתם האדיבה באספקת חיות ניסוי. אנו מעריכים את עזרתו של היראד רזאיפור בהכנה ובעריכה של התמונות.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Anti-K12 antibody | ABCAM | ab185627 | |
Anti-K13 antibody | ABCAM | ab92551 | |
Bovine serum albumin (BSA) | ThermoFisher Scientific | B14 | |
C57BL/6 mice | Dr Weissman Lab, Stanford University | ||
Curved forceps | Storz | E1885 | |
Disposable 90 degree bent needle | |||
Disposable biopsy punch | Med blades | ||
Donkey anti-rabbit IgG H&L | ABCAM | ab150073 | |
Ethanol | ThermoFisher Scientific | T038181000CS | |
Ethiqa XR (Buprenorphine extended-release injectable suspension) | Fidelis Animal Health | ||
Heating pad for mouse | |||
Ketamine hydrochloride | Ambler | ANADA 200-055 | |
OCT | Tissue-Tek 4583 | ||
Ophthalmic surgical scissors | |||
pH Indicator Sticks | Whatman | ||
Phosphate buffered saline (PBS) | ThermoFisher Scientific | AM9624 | |
Prolong gold antifade reagent with DAPI | Invitrogen | P36935 | |
Slit-lamp microscope | NIDEK | SL-450 | |
Sodium fluorescein AK-fluor 10% | Dailymed | NDC17478-253-10 | |
Sterile irrigation solution (BSS) | Alcon | 9017036-0119 | |
Sterile syringe, 1 and 5 ml | |||
Straight forceps | Katena K5 | 4550- Storz E1684 | |
Surgical eye spears | American White 17240 Cross | ||
Surgical microscope | Zeiss S5 microscope | ||
Tetracaine ophthalmic drop | Alcon | NDC0065-0741-14 | |
Timer | |||
Triple antibiotic ophthalmic ointment | Bausch and Lomb | ||
TritonX -100 | Fisher Scientific | 50-295-34 | |
Two-speed rotary tool | 200-1/15 Two Speed Rotary Toolkit | ||
Xylazine | AnaSed | NADA#139-236 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved