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Summary

Aqui, apresentamos um conjunto de manipulações de massagem no modelo de paralisia cerebral de ratos que podem melhorar consideravelmente a função motora de ratos com paralisia cerebral.

Abstract

A paralisia cerebral (PC) é uma doença com alta taxa de incapacidade e morbidade. Os sintomas clínicos da paralisia cerebral são disfunção motora e desenvolvimento postural anormal, muitas vezes acompanhado de comprometimento cognitivo. A massagem, uma terapia tradicional da Medicina Chinesa, pode coordenar Zang e Fu, regular o Qi e o sangue, fazer as vísceras funcionarem mais suavemente e acalmar Yin e Yang. Além disso, tem sido um método eficaz para a PC na clínica. Este trabalho resume um conjunto de manipulações simples e padronizadas de massagem para ratos jovens com PC, que é fácil de seguir. O procedimento segue: primeiro, massagem de quatro acupontos de membros, incluindo Quchi (LI11) e Zusanli (ST36); segundo, massagem dos acupontos abdominais Zhongwan (RN12), Tianshu (ST25), Guanyuan (CV4) e Qihai (CV6); e, por fim, massagem do abdômen dos ratos. Este conjunto de métodos de massagem melhorou consideravelmente a função motora de ratos jovens com PC e é simples, padronizado e fácil de seguir. Adaptamos este conjunto de métodos de manipulação em modelos animais para promover a internacionalização e padronização da massagem.

Introduction

A paralisia cerebral (PC) é uma doença com alta taxa de incapacidade e morbidade. A investigação epidemiológica da paralisia cerebral mostra que 3-5 lactentes apresentam paralisia cerebral em cada 1.000 crianças1. Os sintomas típicos da paralisia cerebral são distúrbio motor central persistente e do desenvolvimentopostural 2, limitação da atividade sensorial3, percepção, cognição4, comunicação5, distúrbio comportamental, epilepsia e problema musculoesquelético secundário1. Até agora, não há cura para esta doença incapacitante ao longo da vida. Os métodos atuais de tratamento incluem terapia porexercícios6, hidroterapia7, estimulação elétrica funcional8, exoesqueleto muscular9, terapia com células do sangue do cordão umbilical10, injeção de toxina botulínica e cirurgia11. No entanto, a reabilitação clínica leva muito tempo e consome muita energia, e a reabilitação requer cooperação ativa dos pacientes, dificultando sua replicação em modelos animais. A cirurgia tem limitações, indicações e irreversibilidade. A medicação oral tem baixa eficácia no tratamento da função motora em crianças com paralisiacerebral12. A terapia com exoesqueleto muscular e a terapia com sangue de cordão umbilical têm custos econômicos elevados e são de difícil custo, tornando fundamental encontrar estratégias de tratamento adequadas.

A massagem é um método de tratamento não invasivo, livre de efeitos colaterais, altamente aceito e econômico para crianças. Foi comprovado em experimentos clínicos13 e animais14 melhorar a disfunção da PC. A medicina tradicional chinesa acredita que a massagem pode melhorar a disfunção da PC regulando os órgãos e desbloqueando os meridianos15. Como um método eficaz de tratamento da MTC, a massagem requer métodos modernos de pesquisa médica para explicar seu mecanismo de ação para promovê-la ao mundo. No entanto, existem limitações objetivas de pesquisa e limitações éticas no estudo de mecanismos relevantes em crianças com PC. Portanto, estudar os mecanismos de massagem relevantes para melhorar a PC em animais é mais conveniente. Embora os animais sejam diferentes das crianças, investigar os efeitos da massagem em animais requer adesão às teorias fundamentais da MTC. Do ponto de vista da zoologia clínica e experimental, vamos replicar esta tecnologia do corpo humano para o corpo animal para estudar a eficácia da massagem, o que ajudará a promover a aplicação da massoterapia.

Primeiro, a medicina tradicional chinesa acredita que a PC pertence aos sintomas de "cinco atrasos" e "cinco maciez"16. As causas da PC são disfunção fetal congênita, insuficiência hepática e renal, insuficiência de essência e qi ou deficiência nutricional adquirida15. O rim domina o crescimento, desenvolvimento, ou regeneração e reparação de órgãos e tecidos humanos, e essas substâncias são cruciais para o crescimento, desenvolvimento, reparação tecidual, e ressurreição do corpo. O Qi Essencial do rim é a base do crescimento e desenvolvimento. A essência renal insuficiente pode levar à falência da medula óssea, distúrbios do qi e do sangue e falta de nutrição nos órgãos internos do corpo, músculos e ossos. Crianças com PC são propensas a atraso no crescimento e desenvolvimento, diminuição da mobilidade articular dos membros e aumento da tensão muscular. Além disso, a doença de longo prazo pode levar à deficiência excessiva e estase sanguínea, causando obstrução do meridiano, levando a deficiência intelectual, resposta lenta, distúrbios motores, ambiguidade de linguagem, fraqueza para deglutir e sintomas de sialorreia, como distúrbios do movimento dos membros.

O baço governa a circulação e transformação, servindo como fonte de qi e bioquímica sanguínea e base da capacidade adquirida. Os meridianos humanos que conectam as vísceras, braços e pernas são vias que circulam qi e sangue, se comunicam para cima e para baixo e regulam yin e yang. Massagear o meridiano de Ren pode melhorar a função renal e regular o qi e o sangue. O uso de acupontos no Meridiano do Baço do Pé Tai-Yin, Meridiano do Estômago do Pé Yang-Ming e Meridiano do Intestino Grosso da Mão Yang-Ming em técnicas de massagem melhoram a função do baço e do estômago, o que ajuda a promover a circulação do Qi e do sangue. A massagem utiliza meridianos, partes específicas e acupontos para fornecer estimulação física benigna ao corpo da criança, causando mudanças reativas da superfície para dentro e de fora para dentro, melhorando assim a circulação sanguínea local e geral, restaurando a excitabilidade normal e a inibição do cérebro e alcançando o equilíbrio correspondente na função sanguínea visceral e tecidual. De acordo com essa teoria, usamos principalmente massagem em acupontos como o abdômen, Zhongwan (RN12), Tianshu (ST25), Guanyuan (CV4) e Qihai (CV6). A massagem abdominal pode melhorar os sintomas clínicos de crianças com PC17,18,19 e é altamente provável que promova o reparo da lesão cerebral através da via cérebro-intestino20. Como o baço e o estômago são a base do desenvolvimento pós-natal, eles podem promover a recuperação de lesões cerebrais, fortalecendo o baço, beneficiando o estômago e repondo o qi e o sangue.

Replicamos essa técnica em ratos para simular ao máximo a intervenção da MTC na PC e descobrimos que a massagem abdominal pode melhorar a disfunção de ratos com PC. Em resumo, apresentamos um conjunto de métodos de estudo da massagem abdominal para investigar os mecanismos relevantes de melhora da PC através da massagem abdominal. Como a existência de muitos gêneros de massagem torna muito difícil estudar os mecanismos de massagem, é necessário padronizar os métodos de massagem.

Protocol

O Comitê de Ética Animal do Hospital Jinshan, afiliado à Universidade Fudan, em Xangai, aprovou este estudo. Ratos jovens da raça Sprague Dawley (SD) foram criados em biotério com FPS das 08:00 às 20:00, escuridão das 20:00 às 08:00, temperatura controlada a 22 °C e umidade relativa interna de 40%-50%. Eles tinham livre acesso a comida e água. Todas as operações experimentais em animais cumprem a ética do bem-estar dos animais de experimentação e os regulamentos de segurança da experimentação animal.

1. Modelo animal de encefalopatia hipóxico-isquêmica neonatal 21

  1. Dividir aleatoriamente 18 filhotes machos de ratos Sprague Dawley (SD), 7 dias após o nascimento (P7), nos seguintes grupos: sham (sem massagem), modelo e Massagem (grupo modelo + massagem) (n = 6 para cada grupo).
  2. Anestesia
    1. Use um aparelho de anestesia com gás para pequenos animais para administrar gás sevoflurano a 5%, ajuste o fluxo de oxigênio para 4 e use uma fração de indução de 4% para anestesiar os ratos jovens. Confirme se o animal está totalmente anestesiado, esperando o ponto em que o rato jovem está deitado de costas, seus membros param de se mover, não há resposta quando tocado e seus músculos relaxam.
    2. Adicione pomada para os olhos e colírios aos ratos jovens anestesiados para evitar o ressecamento dos olhos.
  3. Processo cirúrgico microscópico
    1. Primeiro, desinfete a pele do pescoço de ratos com iodóforo uma vez, depois com etanol 75% uma vez (realize este procedimento três vezes), e faça uma incisão longitudinal de ~0,5 cm de comprimento no meio do pescoço dos ratos jovens. Separe passivamente o tecido subcutâneo direito e exponha a artéria carótida comum.
    2. Modelo e grupos de massagem: Separar cuidadosamente a artéria carótida comum e o nervo vago (Figura 1A). Após a divisão da artéria carótida comum, coagular a artéria carótida comum com um pistol elétrico de coagulação. Após a confirmação da ausência de sangramento, sutura da pele camada por camada e desinfecção da incisão cirúrgica novamente (Figura 1C).
    3. Grupo Sham (Sem PC, sem massagem): Separe apenas a artéria carótida comum sem qualquer tratamento dos vasos sanguíneos. Sutura da pele camada por camada e desinfecção da incisão cirúrgica novamente. Ao observar o rastejamento irrestrito do rato jovem, coloque o rato jovem de volta ao lado do rato mãe.
  4. Desinfetar com iodo após a cirurgia. Coloque os ratos que completaram a cirurgia em uma almofada de isolamento de 37 °C e observe constantemente se a ferida está sangrando e se há inflamação nos olhos.
  5. Coloque o modelo e massageie grupos de ratos jovens em uma câmara de hipóxia aberta e observe por 1 h até que eles despertem.
    NOTA: Quando os ratos jovens podem engatinhar livremente, eles estão prontos para se submeter ao tratamento de hipóxia.
  6. Tratamento da hipóxia
    1. Após a recuperação da anestesia, colocar os ratos jovens em um dispositivo anóxico fechado a 37 °C com condições de gás N 2 a 92% e gásO2 a 8% (2 L/min) por 3 h de hipóxia. Após o tratamento hipóxico, coloque o rato jovem acordado de volta ao lado do rato mãe.
    2. Desinfete os instrumentos cirúrgicos e limpe a câmara hipóxica com álcool. Após a cirurgia, desinfete o rato jovem com iodóforo, monitore a ferida diariamente em busca de sinais de infecção e use estilhaços estéreis. Conclua todo o processo cirúrgico no biotério do FPS e mantenha os animais no biotério do FPS.
    3. Elevar o grupo modelo normalmente após o estabelecimento bem-sucedido do modelo sem quaisquer medidas de intervenção. Submeter o grupo de massagem à intervenção manual após a conclusão da modelagem.
      NOTA: O grupo sham foi alimentado normalmente e não foi submetido a tratamento de hipóxia.
  7. Coloque cada grupo de ratos ao lado dos ratos mãe em cama esterilizada estéril e esterilizada a alta temperatura. Observe-os por 1-2 h até que os ratos mãe alimentem os ratos descendentes. Observe-os todos os dias para verificar se a ferida está sangrando e se há inflamação nos olhos; Observe até que a ferida esteja completamente cicatrizada.

2. Parâmetros da técnica de massagem

NOTA: As principais técnicas de massagem incluem prensagem e fricção como as principais técnicas de intervenção. Antes do experimento, os pesquisadores se basearam na operação de um testador de técnicas que coletou técnicas do especialista em massagem abdominal de Tianjin, Wang Jingui.

  1. Ajustar as forças de prensagem e fricção para 6 N e 3 N, respectivamente22,23,24,25.

3. Manipulação da massagem

NOTA: Certifique-se de que a pressão do polegar do pesquisador sobre os acupontos seja estável e duradoura.

  1. No segundo dia após a operação (P8), retirar as ratas jovens da gaiola sem perturbar as ratas maternas. No grupo de massagem, massageie os ratos do 8º dia de nascimento ao40º dia.
  2. Antes de massagear os ratos jovens, esfregue levemente as mãos para aquecê-los quase à mesma temperatura que a pele dos ratos jovens.
  3. Siga esta sequência de Massagem: Acupontos de Membros → Acupontos de Abdome → Abdômen.
  4. Coloque o rato jovem na palma da mão esquerda e toque suavemente a parte de trás do rato jovem da cabeça à cauda com a superfície do fio de quatro dedos por 1 min para deixá-lo quieto.
  5. Execute as seguintes etapas de fricção.
    1. Esfregue o abdômen do polegar direito e o indicador para frente e para trás.
    2. Esfregue o membro torácico, da extremidade proximal para a extremidade distal por ~30 s. Pressione Quchi (LI11), Waiguan (SJ5) e Hegu (LI4) pontos 10x por 1 s cada vez.
    3. Esfregue as patas traseiras, da extremidade proximal à extremidade distal por ~30 s, e pressione Yanglingquan (SP9), Zusanli (ST36), Sanyinjiao (SP6) e Taichong (LR3) pontos 10x por 1 s cada vez por um período total de ~5 min.
  6. Use o polegar direito para pressionar Zhongwan (RN12), Tianshu (ST25), Guanyuan (CV4) e Qihai (CV6). Pressione cada acuponto 10x, cada vez por ~1 s, com duração de 1 min.
  7. Mantenha o rato jovem prono e pressione e esfregue o ponto de Zhongwan no abdômen com o polegar direito. Pegue o umbigo do rato jovem como o centro e use o polegar para se mover no sentido horário 120x/min por ~5 min.
  8. Finalmente, use a superfície do fio dos quatro dedos da mão direita para tocar suavemente a cabeça do rato jovem em sua cauda, deixá-lo quieto, em seguida, colocá-lo de volta na gaiola e permitir que o rato mãe para alimentá-lo.

4. Localização do acuponto

NOTA: Para ratos nascidos dentro de 2 semanas, o peso e o comprimento dos ratos são os mesmos que os dos camundongos. Portanto, utilizamos métodos de massagem em camundongos na literatura relevante para massagear os ratos durante os 8-15 dias dos ratos24.

  1. Duas semanas a 40 dias depois, tratar os ratos com massagem regular usando os seguintes acupontos: LI11, SJ5, LI4, SP9, ST36, SP6, LR3, RN12, ST25, CV4 e CV626.
    NOTA: Ver Tabela 1 e descrições detalhadas da localização do acuponto de rato em outro lugar26 e Figura 2 para as posições específicas dos acupontos.

5. Peso e teste comportamental

  1. Pesar os ratos jovens diariamente de P7 a P40.
  2. Realizar experimentos comportamentais no feixe de equilíbrio de P37 a P40. Testar a função de equilíbrio motor de ratos jovens utilizando um feixe de equilíbrio (35 cm de comprimento, 1,5 cm de largura e 100 cm de altura).
    1. Coloque o rato jovem na viga de equilíbrio e deixe-o correr para a caixa preta colocada na outra extremidade da viga de equilíbrio.
    2. Realizar treinamento de feixe de equilíbrio para os ratos jovens em P37-P39, 3x ao dia, e realizar um teste em P40. Registre o tempo em que os três grupos de ratos jovens passam pela trave de equilíbrio e o número de vezes que seus membros posteriores deslizam (Figura 1D).
      NOTA: Use o método de sufocação de dióxido de carbono para eutanasiar ratos.

Representative Results

Após a conclusão da modelagem de isquemia e hipóxia27,28,29,30 (o experimento foi concluído no biotério do FEP), os cérebros de ratos jovens foram retirados após 48 h de sobrevida para pesquisa de edema, liquefação e outros fenômenos, como mostra a Figura 3. As mudanças de peso dos ratos jovens nos grupos sham e massagem foram comparadas com as do grupo modelo (Tabela Suplementar S1). O aumento de peso do grupo modelo foi mais lento do que o do grupo massagem (Figura 4), o que mostrou que a massagem melhora o crescimento e o desenvolvimento de ratos jovens com PC. Os resultados do teste do feixe de equilíbrio mostraram que o grupo modelo levou mais tempo para cruzar o feixe do que os grupos sham e massagem (Figura 5A e Tabela Suplementar S2).

Além disso, o número de deslizes de membros posteriores no grupo modelo aumentou significativamente em comparação com o grupo sham (Tabela Suplementar S3). Em contraste, o número de escorregamentos de membros posteriores diminuiu significativamente no grupo massagem em comparação com o grupo modelo (Figura 5B e Tabela Suplementar S3). A intervenção de massagem melhorou significativamente o crescimento e a função motora de ratos PC.

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Figura 1: Processo de modelagem animal e testes comportamentais relacionados . (A) Remoção do nervo vago durante a modelagem. (B) Massagear ratos com 5 semanas de idade. (C) Ratos após o término da isquemia. (D) Ensaio de viga de equilíbrio. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 2: Visualização de alguns acupontos relacionados à massagem abdominal26. Clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura.

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Figura 3: Edema em um dos lados do cérebro após 48 h após o estabelecimento do modelo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 4: Efeitos da massoterapia sobre o peso. Os pesos médios dos filhotes de ratos (n = 6) foram medidos de P7 a P40, e a intervenção hipóxia-isquemia foi realizada em P7. Após a modelagem do HIE, a taxa de crescimento do peso corporal no grupo modelo diminuiu significativamente, e a massagem terapêutica melhorou significativamente (p < 0,05). Os dados são apresentados como média ± DP; #p < grupo Massagem 0,05 em comparação com o grupo Modelo. *p < grupo modelo 0,001 em comparação com o grupo sham. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 5: Efeitos do tratamento com massagem na disfunção motora de ratos com paralisia cerebral. (A) Tempo necessário para os ratos atravessarem a trave (n = 6). (B) Número de escorregões dos membros posteriores dos ratos. Com base nos resultados da Figura 4A,B, o desempenho motor do grupo massagem foi significativamente melhor do que o grupo modelo (p < 0,05). Os dados são apresentados como média ± DP; *p < grupo modelo 0,001 em comparação com o grupo sham. #p < grupo de massagem de 0,01 em comparação com o grupo modelo. **p < grupo modelo 0,0001 em comparação com o grupo sham. ##p < 0,0001 Grupo de massagem em comparação com o grupo modelo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

LI11A depressão interna do músculo extensor radial do carpo e o
SJ5depressão externa do cotovelo
na depressão radioulnar do ponto distal 5/6 no imaginário
LI4linha de conexão punho e cotovelo, posterior ao extensor
tendão do digitorum communis
SP9no primeiro interósseo dorsal, medial à metade do segundo
osso metacarpal, no antepé
ST36na depressão inferior ao côndilo medial da tíbia,
entre tíbia e gastrocnêmio
SP6no ponto proximal um quinto na linha de ST35 para a anterior
lado da prega do tornozelo
RL3na extremidade proximal do um quinto distal na linha imaginária
conectando SP9 e o maléolo medial da tíbio-fibular
CV4na extremidade proximal da depressão entre a primeira e a segunda
ossos metatarsais
ST25no ponto de 3/5 abaixo da linha média ventral que liga o
umbigo ao tubérculo púbico
CV6lateral ao umbigo, no ponto médio da cicatriz umbilical até a linha do mamilo
no ponto de 3/10 abaixo da linha média ventral que liga o
umbigo ao tubérculo púbico

Tabela 1: Posições anatômicas dos diversos acupontos26.

Tabela suplementar S1: Dados brutos dos pesos dos três grupos de ratos. Clique aqui para baixar este arquivo.

Tabela Suplementar S2: Dados brutos de tempo para cruzar o feixe de equilíbrio para os três grupos de ratos. Clique aqui para baixar este arquivo.

Tabela suplementar S3: Dados brutos dos deslizamentos dos membros posteriores dos três grupos de ratos. Clique aqui para baixar este arquivo.

Discussion

O modelo neonatal de isquemia e hipóxia em ratos é o modelo mais clássico para o estudo da paralisia cerebral27,28,29,30. Intervimos em ratos do 8º ao 40º dia, o que equivale aproximadamente a interferir em humanos de 3 meses a 11,5 anos de idade, período áureo para o crescimento e desenvolvimento humano31. Os resultados indicam que a massagem é um método eficaz para melhorar a disfunção da PC. Experimentos animais anteriores demonstraram que a massagem pode reduzir a inflamação e melhorar as funções motoras e cognitivas em ratos jovens com PC14,32. Alguns estudos clínicos demonstraram que a massagem do meridiano das costas e da bexiga melhora a função motora em crianças com PC33. Esses resultados também mostram que a massagem pode encurtar o tempo de passagem de ratos jovens com PC sobre a trave de equilíbrio e reduzir o número de deslizamentos das patas traseiras. Assim, pode-se observar que a massagem abdominal pode melhorar a função motora de ratos jovens com PC.

A medicina tradicional chinesa acredita que a PC pertence aos cinco sintomas tardios e cinco sintomas leves, sendo a deficiência congênita de qi renal o fator fundamental e a fraqueza adquirida do baço e do estômago como fator promotor. O rim governa o osso e gera medula, de modo que, quando o rim está cheio de qi, a medula se torna abundante e a inteligência permanece normal. O baço controla os músculos e membros, portanto, se o baço estiver saudável, os músculos serão fortes e as articulações se moverão livremente. Portanto, é necessário repor o baço e fortalecer os rins, melhorar a função gastrointestinal, mover membros e articulações e melhorar a função. Primeiro, a teoria da MTC sustenta que o abdômen é a raiz de todas as doenças. A massagem abdominal pode limpar para cima e para baixo, separar yin e yang, remover o velho e fazer novo, enriquecer os cinco órgãos internos, expulsar o mal externo, e eliminar doenças internas. Em segundo lugar, pesquisas mostraram que crianças com PC têm menor peso corporal e são propensas à desnutrição, incluindo ingestão excessiva ou desequilibrada, energia ou estado nutricional34,35,36,37. O retardo de crescimento e a desnutrição são comuns em crianças com PC e estão diretamente relacionados à disfunção motora mais grave37. O risco de desnutrição está intimamente relacionado ao prognóstico dos pacientes com PC34,38,39. Atualmente, a principal área de pesquisa da massagem abdominal é melhorar os sintomas gastrintestinais, como dispepsia funcional, constipação, diarreia e anorexia infantil 33,40,41,42. Eventualmente, numerosos estudos mostram que estimular Zhongwan, Tianshu, Guanyuan e Qihai pode tratar doenças gastrointestinais, promover absorção e melhorar o estado nutricional43,44,45. Os pontos abdominais podem tratar doenças gastrointestinais, pentear o mecanismo de qi do energizador central, reabastecer o poder do qi primário e promover a bioquímica do qi e do sangue. Portanto, introduzimos a massagem abdominal no método experimental para melhorar a disfunção motora em ratos jovens com PC.

A massagem abdominal é combinada principalmente com pontos abdominais, complementados por pontos de membros, como Quchi e Zusanli. As colaterais externas e articulações dos quatro acupontos dos membros estão conectadas aos órgãos internos, e a massagem abdominal é usada para obter o melhor efeito terapêutico. Por um lado, estudos experimentais em animais mostram que a acupuntura Zusanli de ratos recém-nascidos com PC hipóxico-isquêmica pode melhorar a função de ratos jovens com PC46. Por outro lado, a pesquisa clínica mostra que a acupuntura no Hegu 47 e outros acupontos podem efetivamente melhorar o desenvolvimento da PC. Quchi e Zusanli são os acupontos no intestino grosso de Yang-Ming do meridiano de Hand48 e no meridiano de Yang-Ming no somatostatina49, que são os acupontos mais comumente usados no tratamento clínico do acidente vascular cerebral na China para melhorar a paralisia dos membros50, 51. Além disso, Quchi e Zusanli são os pontos de confluência dos meridianos do intestino grosso e do estômago, respectivamente. A partir deste ponto, o qi meridiano atinge as vísceras e está conectado às partes superior e inferior e aos meridianos e colaterais. Além disso, acupuntura e moxabustão associada à massagem mostraram melhor efeito na melhora de crianças com PC em resultados de pesquisas clínicas52. Em resumo, a terapia com MTC pode ajudar a melhorar a disfunção de pacientes com PC.

Embora existam muitos estudos sobre como a massagem pode melhorar a PC, a diversidade de técnicas de massagem tornou-se um enorme desafio. Existem muitas escolas de massagem, e as diferenças de força, direção e outros fatores representam inúmeros desafios. Aprendemos uma variedade de métodos de massagem e exploramos um conjunto de técnicas de massagem simples e fáceis. No entanto, não podemos simular uma variedade de técnicas de massagem. Em segundo lugar, o tempo de massagem é uma etapa importante no desenvolvimento de ratos jovens. Seu peso e o rápido crescimento de vários sistemas corporais levam à constante mudança da força dos nossos dedos para ratos em diferentes estágios. Esforços devem ser continuados para estudar a estabilidade da massagem.

Disclosures

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

Acknowledgements

Nenhum

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Animal anesthesia machineRWD OF SCIENCER550
Experimental glovesSri Trang Gloves (Thailand) Co.,Ltd0169
IsofluraneRWD OF SCIENCER510-22-10
RatShanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., Ltd.
YF-3 manipulation testerDeveloped jointly by Shanghai Fudan University and Shanghai University of Traditional Chinese MedicinePatent number of the People's Republic of China (ZL200710187403.1)

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