A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
В данной статье представлено применение метода низкочастотного детектирования, основанного на секвенировании по Сэнгеру при ангиоиммунобластной лимфоме. Дают основание для применения данного метода при других заболеваниях.
При мониторинге минимальной остаточной болезни (МОБ) после лечения опухолей существуют более высокие требования к нижнему пределу обнаружения, чем при выявлении мутаций лекарственной устойчивости и мутаций циркулирующих опухолевых клеток во время терапии. Традиционное секвенирование по Сэнгеру имеет 5%-20% обнаружения мутаций дикого типа, поэтому его предел обнаружения не может соответствовать соответствующим требованиям. Технологии блокирования дикого типа, которые, как сообщается, преодолевают эту проблему, включают амплификацию смещения блокаторов (BDA), нерасширяемые заблокированные нуклеиновые кислоты (LNA), зонды, специфичные для горячих точек (HSSP) и т. д. Эти технологии используют определенные олигонуклеотидные последовательности для блокирования дикого типа или распознавания дикого типа, а затем комбинируют это с другими методами для предотвращения амплификации дикого типа и амплификации мутантных мутантов, что приводит к таким характеристикам, как высокая чувствительность, гибкость и удобство. В этом протоколе используется BDA, блокирующая ПЦР дикого типа в сочетании с секвенированием по Сэнгеру, для оптимизации обнаружения низкочастотных соматических мутаций RHOA G17V, а чувствительность обнаружения может достигать 0,5%, что может обеспечить основу для мониторинга МОБ ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфомы.
Минимальная остаточная болезнь (МОБ) — это небольшое количество раковых клеток, которые все еще присутствуют в организме после лечения. Благодаря своему небольшому количеству, они не приводят к каким-либо физическим признакам или симптомам. Они часто остаются незамеченными с помощью традиционных методов, таких как микроскопическая визуализация и/или отслеживание аномальных сывороточных белков в крови. Положительный результат теста на МОБ указывает на наличие остаточных пораженных клеток. Отрицательный результат означает, что остаточные больные клетки отсутствуют. После лечения рака оставшиеся в организме раковые ....
Данное исследование было одобрено комитетом по рассмотрению медицинской этики Центральной больницы Юнчжоу (номер одобрения: 2024022601). Участники дали информированное согласие.
1. Дизайн грунтовки
Сравните последовательность тестового образца с эталонной последовательностью, чтобы получить статус мутации тестового образца. Технология WBT-PCR на основе BDA позволяет обнаруживать известную мутацию RHOA G17V и другие низкочастотные мутации в интервале амплификации пр?.......
WTB-ПЦР на основе технологии BDA, описанной в этой статье, вводит несовпадающий праймер, комплементарный мутантному типу при разработке обычных праймеров, чтобы конкурировать с диким типом, подавлять дикий тип и амплифицировать мутантный продукт. Затем продукты WTB-PCR был.......
Данное исследование было завершено при финансовой поддержке Kindstar Global Corporation и помощи руководителей Лаборатории молекулярной биологии и коллег из ряда. Спасибо компании, руководителям и соответствующим коллегам за поддержку и помощь. Данная статья используется только для научных исследований и не является коммерческой деятельностью.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Automatic DNA extractor | 9001301 | Qiagen | |
DNA nucleic acid detector | Q32854 | Thermo fisher | |
PCR amplification kit | P4600 | merck | |
PCR instrument | C1000 Touch | Biorad | |
proteinase K solution | D3001-2-A | zymo research | |
proteinase K storage buffer | D3001-2-C | zymo research | |
Sequencing amplification enzyme kit | P7670-FIN | Qiagen |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved