Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

В данной статье представлено применение метода низкочастотного детектирования, основанного на секвенировании по Сэнгеру при ангиоиммунобластной лимфоме. Дают основание для применения данного метода при других заболеваниях.

Abstract

При мониторинге минимальной остаточной болезни (МОБ) после лечения опухолей существуют более высокие требования к нижнему пределу обнаружения, чем при выявлении мутаций лекарственной устойчивости и мутаций циркулирующих опухолевых клеток во время терапии. Традиционное секвенирование по Сэнгеру имеет 5%-20% обнаружения мутаций дикого типа, поэтому его предел обнаружения не может соответствовать соответствующим требованиям. Технологии блокирования дикого типа, которые, как сообщается, преодолевают эту проблему, включают амплификацию смещения блокаторов (BDA), нерасширяемые заблокированные нуклеиновые кислоты (LNA), зонды, специфичные для горячих точек (HSSP) и т. д. Эти технологии используют определенные олигонуклеотидные последовательности для блокирования дикого типа или распознавания дикого типа, а затем комбинируют это с другими методами для предотвращения амплификации дикого типа и амплификации мутантных мутантов, что приводит к таким характеристикам, как высокая чувствительность, гибкость и удобство. В этом протоколе используется BDA, блокирующая ПЦР дикого типа в сочетании с секвенированием по Сэнгеру, для оптимизации обнаружения низкочастотных соматических мутаций RHOA G17V, а чувствительность обнаружения может достигать 0,5%, что может обеспечить основу для мониторинга МОБ ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфомы.

Introduction

Минимальная остаточная болезнь (МОБ) — это небольшое количество раковых клеток, которые все еще присутствуют в организме после лечения. Благодаря своему небольшому количеству, они не приводят к каким-либо физическим признакам или симптомам. Они часто остаются незамеченными с помощью традиционных методов, таких как микроскопическая визуализация и/или отслеживание аномальных сывороточных белков в крови. Положительный результат теста на МОБ указывает на наличие остаточных пораженных клеток. Отрицательный результат означает, что остаточные больные клетки отсутствуют. После лечения рака оставшиеся в организме раковые ....

Protocol

Данное исследование было одобрено комитетом по рассмотрению медицинской этики Центральной больницы Юнчжоу (номер одобрения: 2024022601). Участники дали информированное согласие.

1. Дизайн грунтовки

  1. Традиционная конструкция грунтовки: Разраб.......

Representative Results

Сравните последовательность тестового образца с эталонной последовательностью, чтобы получить статус мутации тестового образца. Технология WBT-PCR на основе BDA позволяет обнаруживать известную мутацию RHOA G17V и другие низкочастотные мутации в интервале амплификации пр?.......

Discussion

WTB-ПЦР на основе технологии BDA, описанной в этой статье, вводит несовпадающий праймер, комплементарный мутантному типу при разработке обычных праймеров, чтобы конкурировать с диким типом, подавлять дикий тип и амплифицировать мутантный продукт. Затем продукты WTB-PCR был.......

Acknowledgements

Данное исследование было завершено при финансовой поддержке Kindstar Global Corporation и помощи руководителей Лаборатории молекулярной биологии и коллег из ряда. Спасибо компании, руководителям и соответствующим коллегам за поддержку и помощь. Данная статья используется только для научных исследований и не является коммерческой деятельностью.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Automatic DNA extractor9001301Qiagen
DNA nucleic acid detectorQ32854Thermo fisher
PCR amplification kitP4600merck
PCR instrumentC1000 TouchBiorad
proteinase K solutionD3001-2-Azymo research
proteinase K storage bufferD3001-2-Czymo research
Sequencing amplification enzyme kitP7670-FINQiagen

References

Explore More Articles

210WTBAITLRHOA G17V

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved