न्यूट्रलाइजेशन परख के माध्यम से SARS-CoV-2 के खिलाफ हास्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की निगरानी के लिए एक आणविक उपकरण के रूप में छद्म टाइप वायरस

स्यूडोटाइप वायरस (पीवी) आणविक उपकरण हैं जिनका उपयोग होस्ट-वायरस इंटरैक्शन का अध्ययन करने और सीरम नमूनों की बेअसर करने की क्षमता का परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है, इसके अलावा जीन थेरेपी में उनके बेहतर ज्ञात उपयोग के अलावा ब्याज की जीन की डिलीवरी के लिए। पीवी प्रतिकृति दोषपूर्ण हैं क्योंकि वायरल जीनोम को विभिन्न प्लास्मिड में विभाजित किया जाता है जो पीवी में शामिल नहीं होते हैं। यह सुरक्षित और बहुमुखी प्रणाली जैव सुरक्षा स्तर 2 प्रयोगशालाओं में पीवी के उपयोग की अनुमति देती है। यहां, हम यहां बताए गए तीन प्लास्मिड के आधार पर लेंटिवायरल पीवी का उत्पादन करने के लिए एक सामान्य पद्धति प्रस्तुत करते हैं: (1) संक्रमण की निगरानी के लिए आवश्यक रिपोर्टर जीन को ले जाने वाली रीढ़ की प्लाज्मिड; (2) पीवी उत्पन्न करने के लिए आवश्यक सभी संरचनात्मक प्रोटीन के लिए जीन ले जाने वाली पैकेजिंग प्लाज्मिड; (3) लिफाफा सतह ग्लाइकोप्रोटीन अभिव्यक्ति प्लास्मिड जो वायरस ट्रोपिज्म को निर्धारित करता है और मेजबान सेल में वायरल प्रविष्टि की मध्यस्थता करता है। इस काम में, SARS-CoV-2 स्पाइक गैर-प्रतिकृति SARS-CoV-2 छद्म टाइप लेंटिवायरस के उत्पादन के लिए उपयोग किया जाने वाला लिफाफा ग्लाइकोप्रोटीन है।

संक्षेप में, पैकेजिंग कोशिकाओं (HEK293T) मानक तरीकों का उपयोग कर तीन अलग प्लास्मिड के साथ सह ट्रांसफ़ेक्ट थे. 48 घंटे के बाद, पीवी युक्त सतह पर तैरनेवाला काटा, फ़िल्टर्ड, और -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया था. SARS-CoV-2 PVs की संक्रामकता का परीक्षण संक्रमण के बाद 48 घंटे की लक्ष्य सेल लाइन में रिपोर्टर जीन (लूसिफ़ेरेज़) की अभिव्यक्ति का अध्ययन करके किया गया था। सापेक्ष ल्यूमिनेसेंस इकाइयों (आरएलयू) के लिए मूल्य जितना अधिक होगा, संक्रमण/पारगमन दर उतनी ही अधिक होगी। इसके अलावा, संक्रामक पीवी को क्रमिक रूप से पतला सीरम नमूनों में जोड़ा गया था ताकि लक्ष्य कोशिकाओं में स्यूडोवायरस के प्रवेश की न्यूट्रलाइजेशन प्रक्रिया का अध्ययन किया जा सके, जिसे आरएलयू तीव्रता में कमी के रूप में मापा जाता है: उच्च न्यूट्रलाइजिंग गतिविधि के अनुरूप कम मूल्य।