A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Aqui, mostramos os procedimentos para knockdown do FAM83A ; os ensaios para detectar seus efeitos sobre a proliferação, migração e invasão de células de câncer cervical; e a sensibilização dessas células à cisplatina. Este estudo fornece um gene alvo promissor para o câncer cervical e uma referência para futuras pesquisas de drogas.
A exploração de genes-alvo tumorais é de suma importância para a prevenção e tratamento do câncer cervical. Neste estudo, descrevemos as etapas envolvidas na identificação de um gene alvo tumoral FAM83A no câncer cervical. Primeiro, o conjunto de dados do Atlas do Genoma do Câncer foi empregado para validar a expressão e o significado prognóstico de FAM83A em mulheres. Um pequeno RNA de interferência (siRNA) foi usado para knockdown do gene FAM83A em células HeLa e C33a . Em seguida, a coloração de 5-etinil-2'-desoxiuridina (EdU) foi conduzida para determinar os efeitos sobre a capacidade de proliferação das células tumorais. Ensaios de cicatrização de feridas e inserção de membrana porosa foram realizados para avaliar a capacidade de migração e invasão de células tumorais.
Western blotting foi usado para quantificar os níveis de proteína relacionada à apoptose. A coloração JC-1 foi empregada para avaliar alterações da função mitocondrial. Além disso, a intervenção com cisplatina (diaminedicloroplatina, DDP) foi utilizada para avaliar o potencial terapêutico do gene alvo. Citometria de fluxo e ensaios de formação de colônias foram conduzidos para validar ainda mais as características anticâncer do gene. Como resultado, o knockdown de FAM83A mostrou inibir a proliferação, migração e invasão de células de câncer cervical e sensibilizar essas células à cisplatina. Essas metodologias abrangentes validam coletivamente o FAM83A como um gene-alvo associado ao tumor, sendo promissor como um alvo terapêutico potencial na prevenção e tratamento do câncer cervical.
O câncer do colo do útero é uma preocupação mundial, pois é um dos principais tipos de neoplasia ginecológica no mundo e é a principal causa de mortalidade relacionada ao câncer emmulheres1. A cirurgia radical e a quimiorradioterapia estão associadas a altas taxas de cura no estágio primário. No entanto, os resultados do tratamento para pacientes em estágio avançado de câncer de colo uterino que desenvolvem doença metastática são muito desfavoráveis2. Portanto, é crucial compreender melhor os mecanismos biológicos subjacentes à migração e invasão de células cancerosas do colo do útero e identificar potenciais alvos terap....
O estudo estava completamente de acordo com as diretrizes de publicação fornecidas pelo TCGA (https://cancergenome.nih.gov/publications/publicationguidelines). Consulte a Tabela de Materiais para obter detalhes relacionados a todos os materiais, reagentes e instrumentos usados neste protocolo.
1. Fonte de dados e análise bioinformática
Análise do banco de dados TCGA e validação do PCR
A partir da análise do banco de dados TCGA, realizamos uma análise comparativa dos níveis de expressão de RNAm em 306 amostras de células de câncer cervical e 13 amostras de células normais para investigar a expressão diferencial de FAM83A. O FAM83A foi regulado para cima no câncer cervical, enquanto sua expressão no tecido cervical.......
A investigação de genes-alvo tumorais é de extrema importância tanto para a prevenção quanto para o tratamento do câncer cervical. A compreensão dos genes específicos que desempenham um papel significativo no desenvolvimento e progressão do câncer cervical fornece informações valiosas sobre os mecanismos moleculares subjacentes da doença. Além disso, a identificação desses genes-alvo pode levar ao desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas e terapias-alvo. Neste estudo, descrevemos o uso da aná.......
Os autores declaram não haver conflitos de interesse neste trabalho.
Este trabalho foi apoiado pela Fundação do Departamento de Ciência e Tecnologia de Jingzhou (nº 2020HC06).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Cells and Medium Formulation | |||
C33a | American Type Culture Collection | ||
Hela | American Type Culture Collection | ||
Modified medium | 10% fetal bovine serum and + antibiotics (100 U/mL penicillin and 100 U/mL streptomycin) | ||
Antibody Information | |||
AKT | 4691, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
Bcl2 | 26593-1-AP, Proteintech Group, Inc | ‘1:1,000 | |
Caspase 3 | 19677-1-AP, Proteintech Group, Inc | ‘1:2,000 | |
cleaved-caspase3 | abs132005; Absin Bioscience Inc. | ‘1:1,000 | |
Cytc | 10993-1-AP; Proteintech Group | ‘1:1,000 | |
GAPDH | 10494-1-AP, Proteintech Group, Inc. | ‘1:8,000 | |
mTOR | 2983, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
PI3K | 4292, Cell Signaling Technology Inc | ‘1:1,000 | |
p-AKT | 4060, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
p-mTOR (Ser2448) | #5536, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
p-PI3K p85 subunit | 17366, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
Secondary antibodies | GB23303, Servicebio | ‘1:2,000 | |
Materials | |||
6-well plate | Corning, NPY | ||
Alexa Fluor 555 | Beyotime | ||
BCA Protein assay kit | Beyotime, China | P0011 | |
ChemiDoc XRS Imager System | BioRad | ||
Enhanced chemiluminescence detection kit | Servicebio, Inc.,China | cat. no. G2014 | |
Fluorescence microscope | Olympus Corporation, Tokyo, Japan | ||
Hifair II 1st Strand cDNA Synthesis Super Mix | 11123ES60, Yeasen Biotech o., Ltd., China | ||
Inverted microscope | Olympus, Tokyo, Japan; | ||
Millicell transwell inserts | Millipore,Bedford, MA, USA | ||
Mitochondrial membrane potential assay kit | Beyotime, China | ||
PMSF | ST506, Beyotime Biotech, Jiangsu, China | #ST506 | |
Real-time quantitative PCR instrument | Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific. China. | ||
RIPA Lysis Buffer | Beyotime Biotech, Jiangsu, China | ||
TRIzol reagent | Invitrogen | 15596026 | |
TRIzol reagent | Takara Bio Inc., Otsu, Japan | ||
Software | |||
Image-Pro | plus 6.0 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved