Лечебная терапия прижигания нитями в Zhuang Medicine и ее применение на крысовой модели синдрома холодового застывания первичной дисменореи

Summary

В данной статье показан стандартизированный процесс прижигания линии лекарств Чжуан на экспериментальных животных. Для достижения повторяемости и точности прижигания линии медицины Zhuang мы разработали симулятор для поддержания силы, тепла и частоты. Мы построили модель дисменореи для экспериментальной проверки на крысах с синдромом холодового свертывания.

Abstract

Терапия прижиганием нитями чжуанской медицины является одним из национальных нематериальных культурных наследий. Это характерная для чжуанского лекарства терапия, которая включает в себя поджигание нити рами, пропитанной раствором препарата чжуанского лекарства, и непосредственное прижигание на определенной акупунктурной точке или части поверхности тела. Этот метод лечения характеризуется сочетанием лекарственного препарата, акупунктурных точек и прижигания, стимулируя рецепторы кожи в акупунктурных точках через тепло прижигания, воздействуя на биохимический метаболизм гистиоцитов и функцию нервной системы, чтобы ингредиенты препарата могли всасываться через кожу. Тем не менее, на терапевтический эффект прижигания линии медицины Чжуан влияют такие факторы, как интенсивность прижигания, интенсивность нагрева и частота прижигания. Ручное управление не может точно контролировать каждый влияющий фактор. В этой статье мы разрабатываем прибор для моделирования прижигания на линии медицины Zhuang для поддержания постоянной силы, тепла и частоты. Частота и теплота могут быть отрегулированы в соответствии с экспериментальными потребностями, и они могут быть применены к изучению экспериментов с обезболивающими, чтобы наблюдать за обезболивающим эффектом прижигания линии медицины Чжуан на животных моделях боли для решения проблемы стандартизации прижигания линии медицины Чжуан в процессе работы на экспериментальных животных. В этом исследовании создана модель первичной дисменореи у крыс с синдромом холодового свертывания крови и представлено подробное введение в подготовку, процесс и меры предосторожности прижигания нитями препарата Чжуан на модели первичной дисменореи у крыс с синдромом холодового свертывания. Вмешательство прижигания нитями Чжуан лекарственного при первичной дисменорее у крыс с синдромом холодового свертывания оценивается с помощью скручивания и инфракрасного тепловизионного определения температуры поверхности тела, интуитивно демонстрируя терапевтический эффект прижигания нитями Чжуан лекарственного, и проводится предварительный анализ механизма его действия.

Introduction

Терапия прижиганием нитями Чжуан - это уникальный метод внешнего лечения, основанный на теории медицины Чжуан, в котором используется нить рами, пропитанная различными растворами для приготовления лекарств Чжуан. После удаления один конец нити рами поджигается на лампе, образуя искру древесного угля в форме бусины, которая затем быстро сжигается непосредственно на определенной акупунктурной точке или части поверхности человеческого тела для профилактики и лечения заболеваний¹. С помощью этой терапии можно лечить различные заболевания и симптомы в клинической практике, особенно хронические боли, гериатрические заболевания, бессонницу, астму, ревматизм и другие хронические заболевания. В клинической практике многие исследователи провели обширные теоретические дискуссии и строгие клинические контролируемые исследования для оптимизации своих операционных техник и объяснения механизма их действия ^2,3,4. Из-за ограниченности экспериментальных материалов на человеке, механизм действия прижигания нитями чжуанской медицины нуждается в дальнейшей проверке с помощью экспериментов на животных. Тем не менее, на терапевтический эффект прижигания линии медицины Чжуан влияют такие факторы, как интенсивность прижигания, интенсивность нагрева и частота прижигания. Ручное управление не может точно контролировать каждый влияющий фактор. Поэтому необходимо разработать инструмент для поддержания влияющих факторов прижигания линии медицины Чжуан, что является направлением будущих экспериментальных исследований.

В этой статье разработан прибор для моделирования прижигания линии Zhuang Medicine для поддержания постоянной силы, тепла и частоты. Частота и теплота могут быть отрегулированы в соответствии с экспериментальными потребностями, и они могут быть применены к изучению экспериментов с обезболивающими, чтобы наблюдать за обезболивающим эффектом прижигания линии медицины Чжуан на животных моделях боли для решения проблемы стандартизации прижигания линии медицины Чжуан в процессе работы на экспериментальных животных.

Принцип проектирования симулятора прижигания для линии лекарств Zhuang Medicine
Чтобы технический персонал в этой области мог лучше понять техническое решение симулятора прижигания Zhuang Medicine Line, ниже приведено подробное описание этого прибора в сочетании с рисунком 1. Имитатор прижигания медицинской линии Zhuang включает в себя основание (1), вспомогательное устройство (2), устройство управления медицинской линией (3), устройство воспламенения (4) и локатор (5). Основание представляет собой прямоугольную конструкцию в целом, верхняя поверхность которой установлена в качестве операционного стола. Опорное устройство включает в себя вертикальную ось и горизонтальную ось, с прорезями для вертикального и горизонтального перемещения, соответственно по вертикальной и горизонтальной осям. Устройство управления медицинской линией включает в себя оболочку, зажимной толкающий компонент, медицинскую линию, входную кнопку и двигательную установку. Зажимно-толкающий компонент и медицинская линия установлены внутри корпуса, входящая кнопка установлена на внешней поверхности корпуса, а входящая кнопка контролируется и подключается к зажимно-толкающему компоненту. Гребной двигатель расположен внутри основания. Устройство зажигания включает в себя опорный вал зажигания, воспламенитель, провод, кнопку зажигания и кнопку регулировки скорости. Воспламенитель установлен на опорном валу зажигания, а опорный вал зажигания расположен вертикально на операционном столе. Воспламенитель соединен с кнопкой регулировки скорости, установленной сбоку от основания, и кнопкой зажигания, установленной на поверхности воспламенителя, через провод. Локатор включает в себя вал позиционирующего стержня и позиционирующее кольцо, при этом позиционирующее кольцо установлено на конце вала позиционирующего стержня, а вал позиционирующего стержня также может выполнять вертикальное перемещение. Вал опоры зажигания и вал позиционирующего стержня представляют собой L-образные конструкции телескопических стержней, а боковая часть основания также оснащена выключателем питания и индикатором питания.

Являясь одним из распространенных гинекологических заболеваний у женщин подросткового возраста, первичная дисменорея (БП) имеет высокий уровень заболеваемости и большой вред, хотя не имеет органического заболевания⁵. Результаты обзора соответствующей литературы показывают, что распространенность первичной дисменореи в разных странах колеблется от 45% до 90%⁶. Другие исследования показали, что первичная дисменорея может быть связана с изменениями простагландинов и интерлейкинов. Повышенный уровень этих факторов может привести к сокращению гладкой мускулатуры матки, спазмам и снижению кровотока в матке ^7,8. В предыдущих клинических исследованиях было установлено, что синдром холодового свертывания крови составляет более половины от общего числа пациентов с первичной дисменореей. В настоящее время методы моделирования дисменореи, связанной с синдромом холодового свертывания, включают стимуляцию ледяным холодом, погружение в ледяную воду с лекарствами, низкотемпературный холодильник, холодный ветер и метод локальной низкотемпературной заморозки конечностей для моделирования клинического синдрома холодового свертывания. У пациентов с первичной дисменореей часто наблюдается системное свертывание холода и застой крови из-за внешнего холода, а боль вызвана обструкцией. Поэтому мы остановили свой выбор на методе ледяной стимуляции. Модель дисменореи установлена с использованием общепризнанной комбинации эстрадиола бензоата и окситоцина⁹. Являясь одним из самых отличительных методов лечения медицины Чжуан, терапия прижиганием нитями медицины Чжуан широко распространена в регионе Гуанси. Его терапевтический эффект при первичной дисменорее, особенно у пациентов с синдромом холодового свертывания, значителен, но механизм действия до сих пор неясен. В данной статье рассматривается влияние терапии нитевым прижиганием препарата Чжуан на эксперимент по скручиванию и инфракрасной термографии области матки у крыс с дисменореей холодового свертывающего типа, а также исследуется возможный механизм лечения дисменореи холодового коагуляционного типа лекарством Чжуан.

Protocol

Эксперименты на животных в этом исследовании были рассмотрены и одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Университета традиционной китайской медицины Гуанси (этическая лицензия No DW20230411-45). Процедуры работы с животными строго соответствуют содержанию Руководящих заключений по лечению экспериментальных животных (Guo Ke Fa Cai Zi [2006] No. 398) и стандартам защиты и использования животных Международного общества по исследованию боли (IASP).

ПРИМЕЧАНИЕ: В этом исследовании использовались самки крыс SPF-класса в возрасте 6 недель с массой тела 200 г ± 20 г. Крысы в эстральной фазе были отобраны на основе вагинальных мазков и разделены на четыре группы методом случайных чисел. Они разделены на группу носителей, модельную группу дисменореи холодового коагуляционного типа (модельная группа), модельную группу дисменореи холодного коагуляционного типа + группу Western Medicine (медицинская группа), модельную группу дисменореи холодового коагуляционного типа + группу прижигания линии Zhuang Medicine (группа прижигания), по 12 крыс в каждой группе.
Группа транспортных средств: Животных обрабатывали физиологическим раствором (0,9% натрия хлорида).
Модельная группа: В процессе моделирования модели дисменореи синдрома холодового свертывания крови не проводилось никакого вмешательства, и выполнялись только те же ограничения и фиксация, что и в группе прижигания.
Группа лекарственных средств: С^6-го дня сенсибилизации ежедневно вводили ибупрофен, растворенный в 0,9% растворе натрия хлорида. Каждой крысе давали 0,06 г/кг.
Группа прижигания: С^6-го дня сенсибилизации ежедневно проводилось лечение прижиганием нитью лекарства Чжуан. Эта группа получала лечение один раз в день в 8 часов утра в течение 7 дней подряд.
Все животные содержатся в Научном центре экспериментальных животных Международной медицинской больницы Гуанси Чжуан (чистый уровень). Крыс кормили в пластиковых клетках по 4 крысы в одной клетке. Они нормально ели и пили, поддерживали чередование циркадного ритма, а в помещении должны быть сухими. Температура в помещении контролировалась на уровне 23 ± 1 °C, а влажность составляла 60% ± 5%.

1. Создание крысиной модели дисменореи с синдромом холодового свертывания крови

1. Замораживание: В 1-12 дни обезболите крыс внутрибрюшинной инъекцией 0,3% пентобарбитала (30 мг/кг), затем положите их на лед на 20 минут ежедневно в течение 12 дней подряд.
2. Сенсибилизация: На 1-12 день подкожно вводите крысам эстрадиола бензоат для повышения чувствительности матки к веществам, вызывающим боль. В^1-й и^12-й дни вводят по 0,8 мг/особь; Со^2-го по^11-й день вводят по 0,4 мг/особь.
3. Индукция боли: На^12-й день, через 1 ч после инъекции эстрадиола бензоата, внутрибрюшинно ввести крысам 2 ЕД окситоцина, вызывающего боль.
   Примечание: Модель была создана с использованием метода замораживания всего тела в сочетании с инъекцией эстрадиола бензоата и окситоцина¹⁰.
4. Обращайтесь с каждой группой животных так, как описано в шагах 1.4.1-1.4.4.
   1. Для крыс в группе транспортных средств не выполнять шаги 1.1-1.3. Обрабатывайте их только физиологическим раствором (0,9% хлорида натрия).
   2. Для крыс в модельной группе выполните шаги 1.1-1.3. Удерживайте животных в группе таким же образом, как и в группе прижигания, но без какого-либо медикаментозного/лечебного вмешательства.
   3. Для крыс в группе лекарства выполните шаги 1.1-1.3. С^6-го дня сенсибилизации (шаг 1.2) растворить ибупрофен в 0,9% растворе натрия хлорида и давать его через зонд ежедневно (0,06 г/кг).
   4. Для крыс в группе прижигания выполните шаги 1.1-1.3. С^6-го дня сенсибилизации (шаг 1.2) проводите лечение прижиганием нитью лекарства Чжуан (раздел 4) один раз в день в 8 часов утра в течение 7 дней подряд.

2. Настройка симулятора прижигания для нитей медицины Чжуан

1. Нажмите и удерживайте кнопку 1 в течение длительного времени, чтобы войти в состояние настройки. Нажмите кнопку 2 (плюс) или кнопку 3 (минус) в кратком нажатии, и появится код 132. Установите вход кнопки на выходе 0,5 см при каждом нажатии.
2. Повторяйте шаг 2.1 до тех пор, пока не появится код 130, и устройство может автоматически воспламениться в течение 6 с после зажигания.
3. Повторяйте шаг 2.1 до тех пор, пока не появится код 131, и прибор автоматически выполнит прижигание дважды.
4. Поверните кнопку регулировки скорости, чтобы установить частоту на 2 раза/с.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Количество кнопок подробно описано на дополнительном рисунке 1.

3. Приготовление нитей медицины Чжуан

1. Приготовление лечебного ликера
   1. Подбирайте конфигурации лекарственных ликеров в соответствии с лечением различных заболеваний. В этом эксперименте было использовано 10 г ладана, 10 г сандалового дерева, 10 г древесного ладана, 10 г персиковых косточек, 10 г сафлора, 10 г хвоста Angelica sinensis, 10 г фанфэна, 10 г красного пиона, 10 г суму, 10 г сухого имбиря и 10 г куркумы. Замочите эти ингредиенты в 1000 мл 75% спирта, а через 10 дней процедите до образования лечебного ликера.
2. Замачивание лекарственной нити: Замочите нить рами в вышеупомянутом лечебном настое не менее чем на 10 дней (Рисунок 2), выньте лекарственную нить для прижигания и запечатайте лечебную нить в бутылке для последующего использования.
3. При использовании каждый раз вынимайте лечебную нить длиной примерно 21 см (рисунок 3).

4. Методы вмешательства прижигания нитями чжуанского лекарства

1. Выбор акупунктурных точек
   ПРИМЕЧАНИЕ: Крыс обезболивают внутрибрюшинным путем внутрибрюшинного введения 0,3% пентобарбитала (30 мг/кг).
   1. Очистите шерсть в области живота крыс с помощью бритвенного станка для мелких животных.
   2. Основываясь на опыте лечения дисменореи с помощью нитевого прижигания, подбирают акупунктурные точки 11,12,13, такие как Шэньцюэ, Гуаньюань, Чжунцзи и маточные акупунктуры. С помощью маркера отметьте вышеуказанные акупунктурные точки в нижней части живота крысы.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Акупунктурные точки см. на рисунке 4 . Шен цюэ (CV8, пересечение верхней 2/3 и нижней 1/3 линии, соединяющей мечевидный отросток и верхний край лобкового симфиза); Гуань юань (CV4, на 25 мм ниже акупунктурной точки Шэньцэ); Чжун цзи (CV3, на 8 мм ниже акупунктурной точки Гуаньюань); Акупунктурная точка левой матки (левая, EX-CA1, открывается на 25 мм влево от акупунктурной точки Чжунцзи); Акупунктурная точка правой матки (Right, EX-CA1, отверстие на 25 мм в правую сторону от акупунктурной точки Чжунцзи).
2. Починка крыс
   1. Закрепите крыс на прозрачной акриловой доске с помощью высокоэластичных резинок (размер акриловой доски 10 см × 15 см × 5 см) для обнажения живота.
   2. Поместите неподвижную крысу на операционный стол симулятора прижигания Zhuang Medicine Line, отрегулируйте кольцо позиционирования так, чтобы оно прилегало к животу крысы, и отрегулируйте положение крысы слева и справа так, чтобы одна отмеченная акупунктурная точка располагалась в центре кольца позиционирования (рис. 5).
3. Установка лекарственной капельницы
   1. Выньте одну размокшую нить и вставьте ее в устройство для контроля нити лекарства.
   2. Вращайте винтовые ручки по вертикальной и горизонтальной осям опорной рамы. Отрегулируйте оболочку устройства управления трубопроводом лекарств вверх и вниз так, чтобы расстояние между нижней частью оболочки и нижней частью установочного кольца составляло 2 см (Рисунок 6), и отрегулируйте вал опоры зажигания и вал позиционирующего стержня соответственно.
   3. Нажмите кнопку ввода проволоки, чтобы обнажить проволоку для лекарства на расстоянии 0,5 см от оболочки (установите конец проволоки на выходе 0,5 см при каждом нажатии) (Рисунок 7).
4. Точечное прижигание
   1. Нажмите кнопку зажигания, и устройство зажигания автоматически воспламенится. По умолчанию время составляет 6 с. После этого автоматическое прижигание будет выполнено дважды, с частотой 2 раза/с (Рисунок 8)
      ПРИМЕЧАНИЕ: Ранее неоднократно было проверено, что в безветренной среде с температурой 23 ± 1 °C и влажностью 60% ± 5% возгорание может образоваться через 6 с.
   2. После прижигания акупунктурной точки переместите прозрачную акриловую рамку, чтобы отрегулировать ее положение так, чтобы следующая акупунктура, требующая прижигания, находилась в центре позиционирующего круга. Повторите шаги 4.3.3 и 4.4.1.

5. Операция подрезания при кручении

1. Введите крысам окситоцин (2 ЕД) и поместите их в пустые клетки.
2. Наблюдайте за реакцией на скручивание каждой крысы в течение 20 минут.
   ПРИМЕЧАНИЕ: За исключением группы транспортных средств, для каждой группы было отобрано по 6 крыс. Если происходит реакция скручивания, первичная модель дисменореи была успешно установлена у крыс¹⁴. Группе физиологического раствора вводили равные дозы физиологического раствора. В этом исследовании использовалась поведенческая оценка, предложенная Schmauss¹⁵: Для нормального исследовательского поведения 0 баллов; Туловище наклонено в одну сторону, а брюшко вогнуто внутрь из-за сжатия, на 1 очко; Разгибание задних конечностей, тыльная сторона задних лап, разгибание туловища с вращением таза, 2 точки; Сокращение мышц живота, разгибание задних конечностей, 3 балла (Рисунок 9) Латентность, количество скручиваний и оценка скручивания реакции на скручивание регистрировались в течение 20 минут. Латентный период корчения крысы — это время (мин) от введения окситоцина (вызывающего боль) до первого появления реакции на извивание у крыс.
   Твист балл = [0 уровень (количество раз) × 0 баллов + 1 уровень (частота) × 1 балл + 2 уровня (частота) × 2 балла + 3 уровня (частота) × 3 балла].

6. Инфракрасное тепловизионное

1. Обезболить оставшихся 6 крыс в каждой группе путем внутрибрюшинного введения 0,3% пентобарбитала в дозе 30 мг/кг, обнажая область проекции матки.
2. После операции поместите крысу в поле зрения объектива инфракрасного тепловизора и запишите температуру проекционного участка матки с помощью инфракрасного тепловизора.
3. Измерьте каждую акупунктурную точку 3 раза и примите среднее значение за температуру этой акупунктурной точки.
4. Экспорт инфракрасных тепловизионных изображений с помощью тепловизионного программного обеспечения (рис. 10).
   Примечание: На^12-й день моделирования (т.е. на^7-й день вмешательства) оставшиеся 6 крыс в каждой группе были подвергнуты инфракрасному тепловизионному наблюдению. У крыс с первичной дисменореей с синдромом холодового свертывания крови будет наблюдаться снижение температуры поверхностной проекции матки. Наблюдение за температурой поверхностной проекции матки у крыс может определить тяжесть синдрома холодового свертывания. Чем ниже температура, тем тяжелее протекает синдром холодового свертывания.

Discussion

В качестве экспериментального метода мануального лечения прижигание нитью лекарства Чжуан делится на розжиг нити лекарства Чжуан, ожидание образования огня бусин и контакт прижигания с кожей. Ключевым фактором в процессе операции прижигания нитями чжуанского лекарства является количество стимуляции прижигания, которое тесно связано с интенсивностью, частотой и теплом и оказывает непосредственное влияние на биологические эффекты прижигания нитями чжуанского лекарства. Как количественно применить количество стимуляции прижигания к базовым экспериментальным исследованиям линии прижигания в Чжуанской медицине является актуальной проблемой, которую необходимо решить, связанной с надежностью, стабильностью и повторяемостью экспериментальных результатов. Поэтому в этой статье разработан симулятор прижигания линии медицины Zhuang, который поддерживает постоянную силу, тепло и частоту. Чтобы сравнить различия между ручным прижиганием и устройством для моделирования прижигания лекарственными нитями Zhuang, мы протестировали температуру проекции поверхности матки в модельной группе, группе ручного прижигания и группе устройств для моделирования прижигания Zhuang Medicine Line. Результаты показали, что температура проекции поверхности тела ручной и аппаратной групп прижигания была выше, чем у модельной группы (p < 0,05). Достоверной разницы в температуре проекции поверхности тела между ручной и аппаратной группами прижигания не выявлено (p > 0,05). Тем не менее, сравнивая стандартные отклонения между двумя группами, можно увидеть, что стандартное отклонение группы устройств относительно невелико, что указывает на сильную стабильность. Стандартное отклонение группы ручного прижигания относительно велико, что указывает на значительные колебания операций ручного прижигания (дополнительный рисунок 2). В то же время, чтобы сравнить, повлияло ли внезапное повышение температуры во время воспламенения на крыс, мы измерили кожу живота до и во время воспламенения группы устройств (используя акупунктурную точку Шенке в качестве точки измерения), и результаты показали, что момент воспламенения не оказал влияния на температуру кожи живота (дополнительный рисунок 3).

Из-за восприимчивости к помехам ветра при розжиге медицинской магистрали рекомендуется использовать симулятор прижигания медицинской линии Zhuang в защищенном месте. После того, как лекарственная нить воспламенена, обычно существует четыре типа тепловых режимов - открытый огонь, полосовой огонь, бортовой огонь и радиальный огонь. Наилучший эффект получается, когда нить имеет форму «бусинного огня», и важно избегать использования открытого огня для прижигания¹⁶. Время образования бусинного огня варьируется после розжига разной толщины лекарственных линий. Поэтому при замене лекарственных линий разной толщины необходимо многократно проверить время образования бусинного огня, установить время задержки на инструменте, а затем выполнить прижигание. Чем больше раз прижигание выполняется на одной и той же акупунктурной точке одновременно, тем сильнее стимуляция. Поэтому необходимо выбрать подходящую частоту прижигания в соответствии с экспериментальными потребностями.

В этом эксперименте была построена модель крыс с дисменореей и синдромом холодового свертывания. С помощью экспериментов по скручиванию и результатов проекции температуры поверхности матки было обнаружено, что прижигание нитями лекарства Чжуан может эффективно улучшить болевую реакцию крыс с дисменореей с синдромом холодового свертывания и повысить температуру проекции поверхности матки, предполагая, что прижигание нитями лекарства Чжуан положительно улучшает болевые симптомы, образованные дисменореей с синдромом холодового свертывания. Клинические исследования показали, что предменструальная терапия в Шэньцюэ, Гуаньюане, Чжунцзи и акупунктурных точках матки может эффективно лечить дисменорею, вызванную свертыванием крови и застоем крови. Они укрепляют основу и питают энергию, тонизируют низший энерджайзер и вытягивают местную ци и кровь. Акупунктурные точки стимулируются сжиганием нитей и прижиганием нитей лекарства Чжуан, сочетая комбинированные эффекты теплопроводности, акупунктурных точек и лечебного ликера для достижения регуляции ци и крови, улучшения кровообращения и устранения застоя крови, а также согревания и рассеивания холода, что может значительно улучшить симптомы дисменореи.

Этот эксперимент все еще имеет определенные ограничения. Из-за технологических ограничений узлы образования бортовых пожаров контролируются с помощью временной задержки в условиях с температурой, влажностью и отсутствием ветра. Следующим шагом является дальнейшая оптимизация прибора и использование функции распознавания изображений для более точного контроля узлов, где происходят возгорания бортов. Кроме того, из-за неспособности панели взаимодействия человека с компьютером отображать подробные параметры, прибор не может визуально отображать такую информацию, как частота и температура. В будущем панель взаимодействия человека и компьютера прибора будет обогащена, чтобы сделать его работу более интеллектуальной.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Estradiol Benzoate Injection	Shanghai Quanyu Biotechnology Animal Pharmaceutical Co., Ltd.	N/A
Ice maker	Guoyi	GYXH-155
Infrared thermal imager	FLUKE	Ti32
Oxytocin Injection	Sichuan Jinke Pharmaceutical Co., Ltd.	N/A
Ramie thread	Guangxi Nanning Shuqin Trading Co., Ltd.	N/A
Zhuang Pharmaceutical Line Moxibustion Simulator	In-house