אפיון מורפולוגיה וסקולרית של ניוון מקולרי נאו-וסקולרי הקשור לגיל על ידי אינדוציאנין אנגיוגרפיה ירוקה

Summary

נכון לעכשיו, אנגיוגרפיה פלואורסצאין (FA) היא השיטה המועדפת לזיהוי דפוסי דליפה במודלים של בעלי חיים של ניאו-וסקולריזציה כורואידית (CNV). עם זאת, FA אינו מספק מידע על מורפולוגיה של כלי הדם. פרוטוקול זה מתאר את השימוש באנגיוגרפיה ירוקה אינדוציאנינית (ICGA) כדי לאפיין סוגים שונים של נגעים של CNV המושרה בלייזר במודלים של עכברים.

Abstract

ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD) הוא גורם מוביל לעיוורון בקרב אנשים מבוגרים, ושכיחותו עולה במהירות עקב הזדקנות האוכלוסייה. ניאו-וסקולריזציה כורואידית (CNV) או AMD רטוב, המהווה 10%-20% מכלל מקרי AMD, אחראית ל-80%-90% מדאיגים של עיוורון הקשור ל-AMD. הטיפולים הנוכחיים נגד VEGF מראים תגובות תת-אופטימליות בכ-50% מהמטופלים. עמידות לטיפול נגד VEGF בחולי CNV קשורה לעיתים קרובות ל- CNV עורקי, בעוד שהמגיבים נוטים להיות CNV נימי. בעוד אנגיוגרפיה פלואורסצאין (FA) משמשת בדרך כלל להערכת דפוסי דליפה בחולי AMD רטובים ובמודלים של בעלי חיים, היא אינה מספקת מידע על מורפולוגיה וסקולרית של CNV (CNV עורקי לעומת CNV נימי). פרוטוקול זה מציג את השימוש באנגיוגרפיה ירוקה אינדוציאנינית (ICGA) כדי לאפיין סוגי נגעים במודלים של עכברי CNV המושרים בלייזר. שיטה זו חיונית לחקר המנגנונים ואסטרטגיות הטיפול בעמידות נגד VEGF ב- AMD רטוב. מומלץ לשלב ICGA לצד FA להערכה מקיפה של דליפה ותכונות כלי דם של CNV במחקרים מכניסטיים וטיפוליים.

Introduction

ניוון מקולרי הקשור לגיל (AMD) הוא מצב שכיח המוביל לאובדן ראייה חמור אצל אנשים מבוגרים¹. בארצות הברית לבדה, מספר חולי AMD צפוי להכפיל את עצמו, ולהגיע לכמעט 22 מיליון עד 2050, לעומת 11 מיליון כיום. ברחבי העולם, המספר המשוער של מקרי AMD צפוי להגיע ל -288 מיליון מדהים עד 2040².

Choroidal neovascularization (CNV), הידוע גם בשם AMD "רטוב" או neovascular, יכול להיות השפעות הרסניות על הראייה עקב היווצרות של כלי דם חריגים מתחת הרשתית המרכזית. זה מוביל לדימום, הפרשה ברשתית ואובדן ראייה משמעותי. הכנסת טיפולים אנטי-וסקולריים בגורם גדילה אנדותל (VEGF), המכוונים ל-VEGF חוץ-תאי, חוללה מהפכה בטיפול ב-CNV. עם ....

Protocol

הניסויים בבעלי חיים שנערכו במחקר זה קיבלו אישור מהוועדות המוסדיות לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) במכללת ביילור לרפואה. כל ההליכים בוצעו בהתאם להנחיות המפורטות בהצהרת האגודה לחקר הראייה והעיניים (ARVO) לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה. במחקר הנוכחי נעשה שימוש בעכברים זכרים ונקבות C57BL/6J.......

Discussion

מחקר זה הדגים את השימוש באנגיוגרפיה ירוקה אינדוציאנינית (ICGA) כדי לזהות את המורפולוגיה של כלי הדם של ניאו-וסקולריזציה כורואידית עורקית ונימי (CNV) במודלים של עכברים עם CNV המושרה בלייזר. תכונות האור הקשור להמוגלובין והאינפרא אדום של צבע ירוק אינדוציאנין (ICG) אפשרו זיהוי של מורפולוגיה CNV, דבר מא?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
32-G Insulin Syringe	MHC Medical Products	NDC 08496-3015-01
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit secondary antibody	Invitrogen	A11008
Anti-α smooth muscle Actin antibody	Abcam	ab5694
Bovine Serum Albumin	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-2323
C57BL/6J mice (7-9 weeks)	The Jackson Laboratory	Strain #:000664
Fluorescein Sodium Salt	Sigma-Aldrich	MFCD00167039
Gaymar T Pump Heat Therapy System	Gaymar	TP-500	Water circulation heat pump for mouse recovery after imaging
GenTeal Gel	Genteal	NDC 58768-791-15	Clear lubricant eye gel
GS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugate	Invitrogen	I21412
Heidelberg Eye Explorerer	Heidelberg Engineering, Germany	HEYEX2
Indocyanine Green	Pfaultz & Bauer	I01250
Ketamine	Vedco Inc.	NDC 50989-996-06
Paraformaldehyde	Acros Organics	416785000
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution (0.5%)	Sandoz	NDC 61314-016-01
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15 clear lubricant eye gel Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06 Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236 Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11 32-G Needle Steriject PRE-32013 1-ml syringe BD 309659 Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250	Heidelberg Engineering, Germany	SPECTRALIS HRA+OCT
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Tropicamide ophthalmic solution (1%)	Bausch & Lomb	NDC 24208-585-64	For dilation of pupils
Xylazine	Lloyd Laboratories	NADA 139-236