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  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Atualmente, a angiografia fluoresceínica (AF) é o método preferido para identificar padrões de vazamento em modelos animais de neovascularização de coroide (CNV). Entretanto, a AF não fornece informações sobre a morfologia vascular. Este protocolo descreve o uso da angiografia verde com indocianina (ICGA) para caracterizar diferentes tipos de lesões de CNV induzida por laser em modelos de camundongos.

Abstract

A degeneração macular relacionada à idade (DMRI) é uma das principais causas de cegueira entre indivíduos mais velhos, e sua prevalência está aumentando rapidamente devido ao envelhecimento da população. A neovascularização da coroide (NVC) ou DMRI úmida, responsável por 10%-20% de todos os casos de DMRI, é responsável por alarmantes 80%-90% da cegueira relacionada à DMRI. As terapias anti-VEGF atuais mostram respostas subótimas em aproximadamente 50% dos pacientes. A resistência ao tratamento anti-VEGF em pacientes com CNV está frequentemente associada à CNV arteriolar, enquanto os respondedores tendem a ter CNV capilar. Embora a angiografia fluoresceínica (AF) seja comumente usada para avaliar padrões de vazamento em pacientes com DMRI úmida e modelos animais, ela não fornece informações sobre a morfologia vascular da NVC (CNV arteriolar vs. CNV capilar). Este protocolo introduz o uso da angiografia verde com indocianina (ICGA) para caracterizar tipos de lesões em modelos de CNV induzida por laser. Este método é crucial para investigar os mecanismos e estratégias de tratamento da resistência anti-VEGF na DMRI úmida. Recomenda-se incorporar ICGA ao lado de FA para avaliação abrangente de vazamento e características vasculares da CNV em estudos mecanísticos e terapêuticos.

Introduction

A degeneração macular relacionada à idade (DMRI) é uma condição prevalente que leva à perda grave da visão em indivíduos idosos1. Somente nos Estados Unidos, o número de pacientes com DMRI deve dobrar, chegando a quase 22 milhões até 2050, em comparação com os atuais 11 milhões. Globalmente, espera-se que o número estimado de casos de DMRI atinja impressionantes 288 milhões até 20402.

A neovascularização da coroide (NVC), também conhecida como DMRI "úmida" ou neovascular, pode ter efeitos devastadores na visão devido à formação de vasos sanguíneos anormais abaixo da retina central. Isso leva a....

Protocol

Os experimentos com animais realizados neste estudo receberam aprovação dos Comitês Institucionais de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Baylor College of Medicine. Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as diretrizes descritas na Declaração da Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) para o uso de animais em pesquisas oftalmológicas e da visão. Camundongos jovens (7-9 semanas) e velhos (12-16 meses) C57BL/6J machos e fêmeas foram usados para o presente estudo. Os animais foram.......

Representative Results

Seguindo o protocolo, ICGA e FA foram realizados em CNV induzida por laser em camundongos C57BL/6J jovens (7-9 semanas) e idosos (12-16 meses). A AF fornece informações sobre a localização e o vazamento das lesões de CNV (Figura 1, painéis esquerdos), enquanto a AGIC revela a morfologia vascular das lesões de CNV (Figura 1, painéis à direita). Em camundongos jovens, a CNV capilar domina as lesões da CNV. Em contraste, camundongos velhos exibem CNV arte.......

Discussion

Este estudo demonstrou o uso da angiografia verde com indocianina (ICGA) para identificar a morfologia vascular da neovascularização arteriolar e capilar de coroide (CNV) em modelos murinos com CNV induzida por laser. As propriedades da luz infravermelha e ligada à hemoglobina do corante verde de indocianina (ICG) permitiram a detecção da morfologia da CNV, o que é desafiador de se conseguir usando a angiografia fluoresceínica (AF), o método atual empregado pela comunidade de pesquisa.

Acknowledgements

Este trabalho foi apoiado por subsídios da BrightFocus Foundation, Retina Research Foundation, Mullen Foundation, e Sarah Campbell Blaffer Endowment in Ophthalmology para YF, NIH core grant 2P30EY002520 para Baylor College of Medicine, e uma concessão irrestrita para o Departamento de Oftalmologia no Baylor College of Medicine da Research to Prevent Blindness.

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Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
32-G Insulin SyringeMHC Medical ProductsNDC 08496-3015-01
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit secondary antibodyInvitrogen A11008
Anti-α smooth muscle Actin antibodyAbcamab5694
Bovine Serum AlbuminSanta Cruz Biotechnology, Inc.sc-2323 
C57BL/6J mice (7-9 weeks)The Jackson LaboratoryStrain #:000664
Fluorescein Sodium SaltSigma-AldrichMFCD00167039
Gaymar T Pump Heat Therapy SystemGaymarTP-500Water circulation heat pump for mouse recovery after imaging
GenTeal GelGentealNDC 58768-791-15Clear lubricant eye gel
GS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugateInvitrogen I21412
Heidelberg Eye ExplorererHeidelberg Engineering, GermanyHEYEX2
Indocyanine GreenPfaultz & BauerI01250
KetamineVedco Inc.NDC 50989-996-06
ParaformaldehydeAcros Organics 416785000
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution (0.5%)SandozNDC 61314-016-01
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15 clear lubricant eye gel Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06 Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236 Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11 32-G Needle Steriject PRE-32013 1-ml syringe BD 309659 Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250Heidelberg Engineering, GermanySPECTRALIS HRA+OCT
Triton X-100 Sigma-AldrichX100-1L
Tropicamide ophthalmic solution (1%)Bausch & LombNDC 24208-585-64For dilation of pupils
XylazineLloyd LaboratoriesNADA 139-236

References

  1. Fleckenstein, M., et al. Age-related macular degeneration. Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 1-25 (2021).
  2. Wong, W. L., et al. Global prevalence of age-related macular degener....

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