Isolement et culture de cellules ciliées cochléaires primaires de souris néonatales

Les cellules ciliées cochléaires sont les récepteurs sensoriels du système auditif. Ces cellules sont situées dans l’organe de Corti, l’organe sensoriel responsable de l’audition, dans le labyrinthe osseux de l’oreille interne. Les cellules ciliées cochléaires se composent de deux types anatomiquement et fonctionnellement distincts : les cellules ciliées externes et internes. Les dommages causés à l’un ou l’autre d’entre eux entraînent une perte auditive. Notamment, car les cellules ciliées internes ne peuvent pas se régénérer et les dommages qui leur sont causés sont permanents. Par conséquent, la culture in vitro de cellules ciliées primaires est indispensable pour étudier les effets protecteurs ou régénérateurs des cellules ciliées cochléaires. Cette étude visait à découvrir une méthode d’isolement et de culture des cellules ciliées de souris.

Après l’ablation manuelle de la paroi latérale cochléaire, l’épithélium auditif a été méticuleusement disséqué du modiolus cochléaire au microscope, incubé dans un mélange composé de 0,25 % de trypsine-EDTA pendant 10 min à 37 °C, et délicatement suspendu dans un milieu de culture à l’aide d’une pointe de pipette de 200 μL. La suspension cellulaire a été passée à travers un filtre cellulaire, le filtrat a été centrifugé et les cellules ont été cultivées dans des plaques à 24 puits. Les cellules ciliées ont été identifiées en fonction de leur capacité à exprimer un complexe de mécanotransduction, la myosine-VIIa, qui est impliquée dans les tensions motrices, et par marquage sélectif de la F-actine à l’aide de la phalloïdine. Les cellules ont atteint >90% de confluence après 4 jours de culture. Cette méthode peut améliorer notre compréhension des caractéristiques biologiques des cellules ciliées cultivées in vitro et démontrer l’efficacité des cultures de cellules ciliées cochléaires, établissant ainsi une base méthodologique solide pour la recherche auditive ultérieure.