Isolierung und Kultivierung von primären Cochlea-Haarzellen aus neugeborenen Mäusen

Cochlea-Haarzellen sind die sensorischen Rezeptoren des Hörsystems. Diese Zellen befinden sich im Corti-Organ, dem Sinnesorgan, das für das Hören zuständig ist, im knöchernen Labyrinth des Innenohrs. Cochlea-Haarzellen bestehen aus zwei anatomisch und funktionell unterschiedlichen Typen: äußeren und inneren Haarzellen. Eine Schädigung eines der beiden führt zu Hörverlust. Vor allem, da sich die inneren Haarzellen nicht regenerieren können und die Schäden an ihnen dauerhaft sind. Daher ist die In-vitro-Kultivierung von primären Haarzellen unabdingbar, um die schützende oder regenerative Wirkung von Cochlea-Haarzellen zu untersuchen. Ziel dieser Studie war es, eine Methode zur Isolierung und Kultivierung von Haarzellen von Mäusen zu finden.

Nach manueller Entfernung der Cochlea-Seitenwand wurde das Hörepithel unter einem Mikroskop sorgfältig aus dem Cochlea-Modiolus präpariert, 10 Minuten lang bei 37 °C in einer Mischung aus 0,25 % Trypsin-EDTA inkubiert und mit einer 200-μl-Pipettenspitze vorsichtig in einem Nährmedium suspendiert. Die Zellsuspension wurde durch einen Zellfilter geleitet, das Filtrat wurde zentrifugiert und die Zellen wurden in 24-Well-Platten kultiviert. Die Haarzellen wurden auf der Grundlage ihrer Fähigkeit identifiziert, einen Mechanotransduktionskomplex, Myosin-VIIa, zu exprimieren, der an motorischen Spannungen beteiligt ist, und durch selektive Markierung von F-Aktin unter Verwendung von Phalloidin. Die Zellen erreichten nach 4 Tagen in Kultur eine Konfluenz von >90 %. Diese Methode kann unser Verständnis der biologischen Eigenschaften von in vitro kultivierten Haarzellen verbessern und die Effizienz von Cochlea-Haarzellkulturen demonstrieren, wodurch eine solide methodische Grundlage für die weitere auditive Forschung geschaffen wird.