Prøveforberedelse til in situ kryotomografi af pattedyrceller

In situ cellulær kryotomografi er en kraftfuld teknik til at studere komplekse objekter i deres oprindelige frosne hydrerede cellulære kontekst, hvilket gør det yderst relevant for cellulær biologi og virologi. Potentialet ved at kombinere kryotomografi med andre mikroskopimetoder gør det til en perfekt teknik til integrativ og korrelativ billeddannelse. Imidlertid er prøveforberedelse til in situ cellulær tomografi ikke ligetil, da celler ikke let fastgør og strækker sig over elektronmikroskopigitteret. Derudover er selve gitterene skrøbelige og kan gå i stykker, hvis de håndteres for kraftigt, hvilket resulterer i tab af billedområder. Geometrien af vævskulturskåle kan også udgøre en udfordring, når man manipulerer gitterene med pincet. Her beskriver vi tips og tricks til at overvinde disse (og andre) udfordringer og forberede prøver af god kvalitet til in situ cellulær kryotomografi og korreleret billeddannelse af klæbende pattedyrceller. Med fortsatte fremskridt inden for kryomikroskopiteknologi rummer denne teknik et enormt løfte om at fremme vores forståelse af komplekse biologiske systemer.